戴翔
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 淋球菌孔蛋白PIB和PIA融合蛋白真核表达载体构建及体内表达
- 2006年
- 目的克隆淋球菌孔蛋白PIB和PIA基因并构建融合蛋白真核表达质粒pCI-PIB-PIA,了解pCI-PIB-PIA能否被小鼠骨骼肌细胞摄取并表达。方法采用PCR方法从质粒pET-PIB和pET-PIA中获得孔蛋白PIB和PIA全长DNA片段,构建表达融合蛋白PIB和PIA的真核表达载体pCI-PIB-PIA。pCI-PIB-PIA肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ABC法检测pCI-PIB-PIA免疫小鼠肌细胞中PIB-PIA融合蛋白的表达。结果PCR可扩增出预期大小的全长PIB和PIA基因片段。与GenBank报道的PIB和PIA序列比较,重组质粒pCI-PIB-PIA中目的插入片段的核苷酸序列同源性达到99%以上。免疫小鼠的肌细胞能摄取pCI-PIB-PIA并表达PIB-PIA融合蛋白。结论本研究成功地构建了淋球菌孔蛋白PIB和PIA基因重组真核表达载体pCI-PIB-PIA;pCI-PIB-PIA接种小鼠后可见免疫小鼠肌细胞中PIB-PIA融合蛋白的表达,该结果可作为淋球菌多价DNA疫苗的研究基础。
- 廖芳贺超戴翔宋启发熊萍
- 关键词：淋球菌孔蛋白融合蛋白
- 淋病奈瑟菌膜蛋白抗原表位的研究被引量：1
- 2007年
- 目的利用人工合成多肽制备针对淋球菌外膜蛋白PIB抗原表位的特异性多克隆抗体,以期用于淋球菌的检测,为进一步建立新型淋病快速诊断方法提供研究基础。方法根据PIB抗原表位的氨基酸序列合成一段多肽(LD1),并将其与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联构成完全抗原LD1-KLH,免疫动物,收集抗血清,用ELISA和Western blot检测其特异性。结果ELISA检测表明,LD1-KLH具有免疫原性,免疫动物能刺激机体产生较强的体液免疫反应,兔血清抗体和豚鼠血清抗体效价最高分别达到1:3200和1:25600;抗血清能与淋球菌临床株特异性结合,与葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌和真菌等其他微生物之间没有交叉反应;Westernblot结果显示,抗血清能识别淋球菌裂解物,产生特异性条带,相对分子质量(Mr)为37300。结论人工合成多肽具有免疫原性,能诱导机体产生识别淋球菌抗原表位的特异性抗体。
- 戴翔廖芳黄进周俊立张玲
- 关键词：淋病奈瑟菌外膜蛋白表位多肽
