张婵
- 作品数：7 被引量：23H指数：2
- 供职机构：泸州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：四川省卫生厅科研基金四川省教育厅科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- Pin1siRNA慢病毒载体构建及稳定转染A549细胞株
- 目的 构建Pin1siRNA慢病毒载体,建立稳定抑制Pin1表达的A549细胞系.方法 根据查阅文献获得Pin1,siRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1siRNA慢病毒载体,...
- 赵帅董文斌张婵李清平康兰雷小平郭琳翟雪松
- 慢病毒载体靶向介导p66shc基因沉默被引量：1
- 2015年
- 目的构建p66shc基因重组慢病毒表达载体,并将之转染至293T细胞,通过RNA干扰致使p66shc基因沉默,为进一步研究p66shc基因功能奠定基础。方法筛选3个RNA靶点,命名为p66shc-shc1、p66shc-shc2、p66shc-shc3,与双酶切后的pLenR-绿色荧光蛋白(GPH)(含有GFP表达)连接,转化入感受态的DH5α细胞,挑取阳性克隆测序正确后,与pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G一起转染293T细胞,于倒置荧光显微镜下检测GFP的表达,证实病毒包装成功。使用荧光定量PCR及Western blot技术检测p66shc在基因及蛋白水平的表达,选取有效沉默p66shc基因的p66shc-shc1靶点,为后续试验做准备。结果成功构建表达p66shc的shRNA慢病毒载体并转染至真核生物细胞内,通过荧光定量PCR及Western blot技术检测其通过RNA干扰导致细胞内p66shc基因沉默。结论靶向表达p66shc的shRNA慢病毒载体,转染入真核生物细胞内可通过RNA干扰在分子及蛋白水平导致p66shc基因沉默。
- 张婵董文斌赵帅李清平康兰雷小平郭琳翟雪松
- 关键词：慢病毒属RNA干扰P66SHC
- Pin1siRNA慢病毒载体构建及稳定转染A549细胞株
- 目的 构建Pin1siRNA慢病毒载体,建立稳定抑制Pin1表达的A549细胞系.方法 根据查阅文献获得Pin1,siRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1 siRNA慢病毒载体...
- 赵帅董文斌张婵李清平康兰雷小平郭琳翟雪松
- 关键词：PIN1慢病毒载体A549细胞
- 白藜芦醇上调人肺泡上皮细胞SIRT1表达抑制高氧诱导的细胞凋亡被引量：18
- 2015年
- 目的探讨去乙酰化酶SIRT1激动剂白黎芦醇(Res)对高氧诱导人肺泡上皮细胞(HPAEC)凋亡的保护作用。方法体外培养HPAEC,随机分为对照组、高氧组、Res组。培养24 h,采用免疫细胞化学SP法检测caspase-9、X联锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、SIRT1蛋白的表达,采用Mito SOXTM、JC-1标记结合激光共聚焦显微镜分别检测HPAEC线粒体内活性氧(ROS)及其膜电位的变化,Western blot法检测SIRT1蛋白的表达,annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双标记结合流式细胞术检测HPAEC细胞凋亡率的变化。结果对照组相比,高氧组HPAEC中caspase-9蛋白表达增强、线粒体内ROS增加、细胞凋亡率增加,而XIAP、SIRT1蛋白的表达减少、膜电位降低;与高氧组相比,Res组HPAEC中caspase-9的表达减弱、线粒体内ROS产生减少、细胞凋亡率降低,XIAP、SIRT1蛋白表达增强、膜电位增高。结论 Res通过上调HPAEC中SIRT1的表达,减少ROS的产生从而维持细胞膜电位抑制肺泡上皮细胞凋亡,减轻高氧所致肺损伤。
- 张春艳李清平康兰雷小平翟雪松赵帅张婵董文斌
- 关键词：高氧肺泡上皮细胞白藜芦醇
- 沉默Pin1表达抑制高氧诱导人肺泡上皮细胞凋亡被引量：2
- 2015年
- 目的研究沉默Pin1表达对高氧诱导人肺泡上皮细胞(A549细胞)凋亡的影响。方法在体外常规培养A549细胞,随机分为对照组、高氧组、空载体组和Pin1-sh RNA组,以3L/min速度向各处理组细胞中通入95%O_2和5%CO_2的高纯混合气10min。培养24h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;SP细胞免疫化学法检测细胞凋亡相关蛋白XIAP和Caspase-9表达;荧光显微镜检测细胞线粒体活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位。结果高氧组和空载体组细胞均生长状态差,Pin1-sh RNA组活细胞数量较高氧组和空载体组多,但比对照组少。与对照组相比,高氧组和空载体组细胞凋亡率增加、Caspase-9表达增加、XIAP表达降低、ROS含量增加、线粒体膜电位下降(均P<0.05)。而Pin1-sh RNA组与高氧组和空载体组相比,细胞凋亡率下降、Caspase-9表达降低、XIAP表达增加、ROS含量降低、线粒体膜电位升高(均P<0.05),但与对照组相比差异亦有统计学意义(均P<0.05)。结论抑制人肺泡上皮细胞Pin1表达可减轻高氧诱导的细胞凋亡。
- 赵帅董文斌张婵李清平康兰雷小平翟雪松
- 关键词：PIN1高氧
- 慢病毒介导的shRNA对A549细胞Pin1表达的干扰作用被引量：3
- 2014年
- 目的构建Pin shRNA慢病毒载体,建立稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)表达的A549细胞系。方法根据查阅文献获得Pin1shRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体,随后转入人胚肾HEK293T细胞中,收集其上清进行病毒滴度测定,再行慢病毒的包装,将获得的慢病毒毒液感染A549细胞。通过实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测Pin1在不同组的表达抑制情况。结果经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体质粒,包装并得到高滴度的病毒颗粒。通过qRT-PCR和Western blot法检测显示,与对照组相比,pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体感染的A549细胞中Pin1的表达在mRNA和蛋白水平均有所下降。结论慢病毒介导的shRNA能够有效下调A549细胞中Pin 1的表达。
- 赵帅董文斌张婵李清平康兰雷小平郭琳翟雪松
- 关键词：慢病毒载体A549细胞基因表达
- 慢病毒载体靶向介导P66shc基因沉默
- 目的 构建P66shc基因干扰慢病毒载体,导致P66shc基因靶向沉默,为进一步研究P66shc功能奠定基础。方法 筛选3个RNA靶点,命名为P66shc-shc1,P66shc-shc2,P66shc-shc3,与双酶...
- 张婵董文斌赵帅李清平康兰雷小平郭琳翟雪松
- 关键词：P66SHC慢病毒RNA干扰
