崔小荣 作品数:9 被引量:15 H指数:3 供职机构: 青岛农业大学动物科技学院 更多>> 发文基金: 山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金 国家科技重大专项 转基因生物新品种培育专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
猪CTSZ基因的克隆及真核表达载体的构建 被引量:1 2017年 组织蛋白酶Z基因(Cathepsin Z gene,CTSZ)是影响猪生长、肉质等性状的一个重要候选基因。本研究以长白猪的背最长肌为试验材料,采用RT-PCR的方法克隆CTSZ基因CDS序列全长,对该序列进行了生物信息学分析,并构建pEGFP-N1-CTSZ融合表达载体,通过脂质体介导瞬时转染猪成纤维细胞,30h后进行荧光表达检测。结果本试验克隆出猪CTSZ基因CDS全序列912bp,并成功构建pEGFP-N1-CTSZ融合表达载体,瞬时转染后在猪成纤维细胞中表现为绿色荧光蛋白表达。本试验为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。 崔小荣 于光辉 李晓玲 张廷荣 孙金海关键词:真核表达 长白猪 瞬时转染 猪A-FABP基因真核表达载体的构建及其组织表达 李晓玲 于光辉 崔小荣 张廷荣 孙金海猪A-FABP基因真核表达载体的构建及其组织表达 被引量:6 2018年 本实验以长白猪背最长肌为实验材料,进行组织RNA的提取及A-FABP基因的克隆,构建p EGFPN1-A-FABP真核表达载体,并通过脂质体转染成纤维细胞,48 h观察荧光表达。同时应用荧光定量PCR法检测猪7种不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌)中A-FABP基因的差异表达。结果表明:成功构建p EGFP-N1-A-FABP融合表达载体,并在细胞中表达绿色荧光蛋白;A-FABP基因在7种组织中均有表达,其中背最长肌和腿肌中A-FABP基因的表达量最高,与其他组织相比差异极显著(P<0.01),而脾脏和肾脏中的表达量相对于心脏、肝脏和肺脏差异显著(P<0.05),而A-FABP基因表达量在心脏、肝脏和肺脏中差异不显著(P>0.05)。表明该基因能够在真核载体和细胞中表达,并且在猪不同组织的表达具有差异性。 李晓玲 于光辉 崔小荣 张廷荣 孙金海关键词:A-FABP基因 真核表达载体 F1代转pGH、IGF-1双基因猪的阳性鉴定及其差异性表达 2017年 为了探究转pGH、IGF-1双基因猪F1代阳性率及表达差异情况,试验采用PCR、测序及荧光定量PCR检测转pGH、IGF-1双基因猪的mRNA表达水平。结果表明:53头F1代猪中17头为阳性猪,阳性率为32.08%,证实外源pGH和IGF-1基因已遗传到F1代中;1月龄到4月龄转双基因猪与非转基因猪IGF-1和pGH基因平均表达量均无显著性差异(P>0.05);5月龄转双基因猪pGH和IGF-1基因平均表达量分别是非转基因猪的1.98倍和2.00倍,存在显著差异(P<0.05);6月龄转双基因猪pGH和IGF-1基因平均表达量分别是非转基因猪的1.67倍和1.73倍(P<0.05)。说明pGH、IGF-1双基因已遗传至F1代猪中,并且能够在猪体内稳定表达。 宋玉芹 范岩岩 李晓玲 王友升 崔小荣 张廷荣 孙金海关键词:IGF-1基因 荧光定量PCR 转pGH基因猪成纤维细胞系的建立及鉴定 崔小荣 李晓玲 魏成晓 孙金海 张廷荣转双基因(pGH+IGF-1)猪胎儿成纤维细胞系的建立及鉴定 李晓玲 于光辉 崔小荣 孙金海 张廷荣猪A-FABP基因的克隆及其组织差异性表达 被引量:3 2017年 为了进行猪A-FABP基因的克隆及不同器官组织中的差异表达,试验采用RT-PCR方法从长白猪背最长肌中克隆A-FABP基因的cDNA序列并进行测序比对,分别与人、牛、山羊、家鼠及鸡进行同源性比较,应用半定量RT-PCR方法检测猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌中A-FABP基因的表达。结果表明:成功克隆得到A-FABP基因的cDNA序列,且比对结果为100%,该序列与人、牛、羊的同源性分别为90.98%、89.97%、89.97%,与鸡的同源性为73.68%。半定量RT-PCR结果为A-FABP基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌器官组织中均有表达,其中背最长肌和腿肌中A-FABP基因的表达量最高,肺脏内的表达量最低,A-FABP基因在动物进化中具有高度保守性,该基因在猪不同器官组织中的表达具有差异性。 李晓玲 崔小荣 窦成利 于光辉 张廷荣 孙金海关键词:A-FABP基因 克隆 同源性 转pGH基因猪与非转基因猪成纤维细胞系的建立及鉴定 被引量:3 2017年 本试验采用组织块贴壁法对初生仔猪的耳组织进行原代培养,成功分离出转pGH基因猪与非转基因猪成纤维细胞,并对细胞进行形态学观察,冻存前和复苏后细胞活力检测,生长动力学分析,波形蛋白免疫组化,染色体计数以及微生物污染检测等生物学特性分析。结果表明,原代细胞经过胰蛋白酶消化和差速离心分离培养出成纤维细胞,7组细胞冻存前细胞活力均在为92%以上,冻存3个月后细胞复苏活力仍在89%以上;细胞生长总趋势呈"S"型,即经历了潜伏期、指数生长期和平台期3个阶段;细胞波形蛋白免疫组化在成纤维细胞中呈阳性反应;染色体计数结果表明,染色体数量稳定;成纤维细胞的细菌、真菌、病毒和支原体检测均为阴性。本试验成功建立了转pGH基因猪与非转基因猪成纤维细胞系。 崔小荣 李晓玲 于光辉 魏成晓 赵玲玲 巩建飞 张廷荣 孙金海关键词:转基因猪 成纤维细胞系 细胞培养 生物学特性 猪肌内脂肪调控相关基因的研究进展 被引量:3 2016年 脂肪不仅是动物能量的主要来源,而且还与肉品的风味品质及食用价值有很大的关系。猪肌内脂肪的含量是影响猪肉品质的一个重要因素,它影响肉的嫩度、系水力、剪切力值、风味和多汁性。肌内脂肪的沉积受多种因素的影响,包括遗传、营养、环境等因素。该文首先介绍肌内脂肪对猪肉品质的影响,其次,再从基因水平阐述各种基因对肌内脂肪调控的相关研究进展,以期通过调控肌内脂肪含量获得更高品质的猪肉产品。 李晓玲 崔小荣 孙金海关键词:猪肉品质 肌内脂肪 基因