高云鹏
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 梅花鹿胸腺素β4基因真核表达载体的构建及鉴定
- 2017年
- 为了构建梅花鹿胸腺素β4(Tβ4)基因真核表达载体,使用TRIzol法提取梅花鹿鹿茸总RNA,RT-PCR方法特异性扩增梅花鹿Tβ4基因,目的基因插入真核表达载体VR1012构建表达质粒,将质粒瞬时转染到293T人胚肾细胞系,使用Western blot和免疫荧光方法检测目的基因的表达。结果显示:克隆得到的梅花鹿Tβ4基因长度为135 bp,编码44个氨基酸,成功构建真核表达载体VR1012-Tβ4-HA,转染后梅花鹿Tβ4在293T细胞中表达,而且主要表达在细胞浆中。本试验为进一步研究Tβ4在鹿茸生长中的作用奠定了基础。
- 王佳雯高云鹏王敏王思明赵雨白雪媛
- 关键词：梅花鹿胸腺素Β4质粒构建转染真核表达
- 人参Cu/Zn SOD原核可溶性表达条件的优化被引量：4
- 2018年
- 目的在大肠杆菌中高效表达可溶性人参SOD,纯化后检测其活性。方法人参SOD cDNA插入到原核表达载体pET30α中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达。分别对诱导时间、诱导温度、IPTG浓度以及离子浓度进行条件优化。对表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色检测。检测上清中蛋白的抗氧化活性。结果双酶切结果显示质粒构建成功,经过条件优化,表达的SOD蛋白主要存在于破碎菌体的上清中,表达量约占菌体上清总蛋白的50%,上清酶活达到363.9 U/mg。结论成功在大肠杆菌中高效表达了可溶性人参SOD蛋白,且具有较高的酶活性,为其工业化生产和应用奠定了基础。
- 高云鹏赵雨王思明刘美辰王佳雯
- 关键词：人参CU/ZNSOD可溶性表达原核
- 梅花鹿鹿茸软骨细胞和间充质干细胞永生化细胞株的构建及鉴定被引量：2
- 2017年
- 分离梅花鹿鹿茸软骨细胞和间充质干细胞,使用SV40 LT抗原慢病毒载体建立永生化软骨细胞和间充质干细胞系并鉴定。将含有SV40 LT基因片段的慢病毒载体,转染人胚肾细胞293T获得包装后的病毒粒子,感染鹿茸软骨细胞及间充质干细胞,连续传代培养,通过形态观察、细胞增殖、real-time PCR、甲苯胺蓝染色法和流式细胞术等方法检测SV40 LT抗原表达以及细胞性质。实验所建立的永生化鹿茸软骨细胞系与间充质干细胞系能够稳定传代并具有较强的体外增值活性。RT-PCR检测到SV40T抗原的表达,通过甲苯胺蓝染色法和流式细胞术鉴定所得细胞系具有原代细胞的基本性质。成功获得永生化的软骨细胞与间充质干细胞系,为后续鹿茸生长及发育研究奠定了基础。
- 王佳雯高云鹏王敏王思明赵雨白雪媛
- 关键词：软骨细胞间充质干细胞永生化慢病毒载体
- 重组人表皮生长因子在毕赤酵母X33中的构建、表达和纯化被引量：3
- 2018年
- 在毕赤酵母X33中表达人表皮生长因子并纯化,对表皮生长因子(EGF)进行密码子优化,构建pPICZa A-EGF真核表达质粒,转化X33感受态细胞;利用抗性筛选以及PCR鉴定阳性菌株。经过甲醇诱导和镍柱纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白分泌表达情况。成功构建了表达pPICZa A-EGF真核表达质粒,转入X33中获得阳性菌株,成功诱导蛋白分泌表达并纯化。在毕赤酵母X33中成功表达人表皮生长因子,纯化后纯度为80%,收率为5.8 mg/L。
- 高云鹏赵雨王新宇白雪媛王佳雯
- 关键词：表皮生长因子毕赤酵母蛋白表达纯化
- 梅花鹿胸腺素beta10基因真核表达载体的构建及鉴定
- 2017年
- 转录组测序发现Tβ10在鹿茸中高表达,为了研究Tβ10与鹿茸生长发育间的关系,构建Tβ10真核表达载体。使用Trizol法提取梅花鹿鹿茸总RNA,PCR技术特异性扩增梅花鹿Tβ10基因,利用酶切位点将目的片段插入真核表达载体VR1012构建表达质粒,通过Fugene~?6将质粒瞬时转染到293T细胞中,使用Western blotting和免疫荧光方法检测目的基因的表达。结果发现克隆得到的梅花鹿Tβ10基因长度为129bp,编码42个氨基酸,成功构建真核表达载体VR1012-Tβ10-HA,转染后使用Western blotting方法检测到梅花鹿Tβ10在293T细胞中表达,免疫荧光方法证明梅花鹿Tβ10主要定位在细胞浆中。
- 王佳雯高云鹏孙天霞刘美辰赵雨王思明
- 关键词：梅花鹿质粒构建转染真核表达
- 梅花鹿MMP--2催化域的克隆、表达及纯化
- 目的:实现梅花鹿基质金属蛋白酶-2催化域(Catalytic domain of matrix metalloprotease2，cdMMP-2)的体外表达，为进一步研究基质金属蛋白酶-2催化域结构功能及产品开发应用奠定...
- 高云鹏
- 关键词：梅花鹿基因克隆蛋白表达蛋白纯化
- 文献传递
