目的：研究甘草苷对中波紫外线（UVB）诱导人皮肤角质形成细胞（Ha Ca T）凋亡的影响。方法：以不同浓度的甘草苷作用于Ha Ca T细胞,噻唑蓝（MTT）比色法筛选甘草苷的有效安全浓度;用30 m J·cm-2的UVB作用于Ha Ca T细胞,建立光老化模型,MTT比色法检测光老化Ha Ca T细胞增殖率;流式细胞术检测各组细胞中活性氧自由基（ROS）含量和总凋亡率;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测光老化Ha Ca T细胞中半胱氨酸天冬氨酸-3（Caspase-3）,半胱氨酸天冬氨酸-9（Caspase-9）mRNA表达水平;蛋白免疫印记法（Western blot）检测光老化Ha Ca T细胞中B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量。结果：筛选出甘草苷的最佳有效安全浓度为1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低（P〈0.01）,细胞中ROS含量和总凋亡率显著升高（P〈0.01）,Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著升高（P〈0.01）;Bcl-2蛋白表达量显著降低（P〈0.01）,Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著升高（P〈0.01）。与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草苷＋UVB组细胞增殖率显著升高（P〈0.01）;细胞中ROS含量和总凋亡率显著降低（P〈0.05,P〈0.01）,Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著降低（P〈0.05,P〈0.01）;Bcl-2蛋白表达量显著升高（P〈0.05,P〈0.01）,Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著降低（P〈0.05,P〈0.01）。结论：甘草苷能通过促进抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,减少促凋亡相关细胞因子Caspase-3,Caspase-9 mRNA和蛋白的表达,从而抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡。
目的:研究甘草次酸对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)细胞光老化的保护作用及相关炎症因子影响。方法:用不同浓度的甘草次酸作用于Ha Ca T细胞,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖率,筛选出药物最佳有效浓度;用30 m J·cm-2的UVB照射Ha Ca T细胞,建立光老化模型,用3个不同浓度的甘草次酸作用于光老化细胞,MTT比色法检测光老化Ha Ca T细胞增殖率;谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),过氧化氢酶(CAT)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒分别检测甘草次酸对光老化Ha Ca T细胞中GSH-Px,CAT和LDH活性的影响;蛋白免疫印记法(Western blot)检测甘草次酸对光老化Ha Ca T细胞中白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达量的影响。结果:筛选出1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草次酸为最佳有效浓度。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P<0.01),GSH-Px,CAT活性显著降低,LDH活性显著升高(P<0.01),IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白表达量显著升高(P<0.05,P<0.01)。与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草次酸+UVB组细胞增殖率显著上升(P<0.01),GSH-Px,CAT活性显著上升,LDH活性显著降低(P<0.01),IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:甘草次酸可通过提高GSH-Px,CAT活性,降低LDH活性,减少炎症因子IL-1β,IL-6和TNF-α的表达,从而抑制UVB诱导Ha Ca T细胞光老化。
目的研究黄芩素对皮肤光老化模型中细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响。方法使用照射强度为0.5 m J/cm2的UVB型紫外线辐照计,照射不同时间制备光老化细胞模型。细胞分为对照组,模型组,黄芩素1×10^(-7)、1×10^(-6)、1×10^(-5) mol/L组。使用流式细胞仪检测各组细胞中活性氧(ROS)量的变化,q RT-PCR检测各组细胞中白细胞介素-1α(IL-1α)、IL-8 m RNA表达量,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测各组细胞中IL-1α、IL-8、p-ERK、ERK蛋白的表达量。结果与对照组比较,模型组细胞出现皱缩、椭圆形,细胞边缘有破损现象,趋于死亡状态。与模型组相比,1×10^(-7) mol/L黄芩素组细胞破损现象减轻,1×10^(-6) mol/L黄芩素组细胞无明显的皱缩及破损现象,1×10^(-5) mol/L黄芩素组细胞状态良好,接近于正常状态;与对照组比较,模型组细胞中ROS的量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,1×10^(-7)、1×10^(-6)、1×10^(-5) mol/L黄芩素组细胞中ROS的量显著降低(P<0.01);与对照组比较,模型组IL-1α、IL-8 m RNA表达量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,1×10^(-7)、1×10^(-6)、1×10^(-5) mol/L黄芩素组细胞中IL-1α、IL-8 m RNA的表达量显著降低(P<0.01);与对照组比较,模型组细胞IL-1α、IL-8、p-ERK蛋白表达量显著升高(P<0.01),ERK蛋白表达量不变。与模型组比较,1×10^(-7)、1×10^(-6)、1×10^(-5) mol/L黄芩素组细胞中IL-1α、IL-8、p-ERK蛋白表达量显著降低(P<0.05、0.01),ERK蛋白表达量不变。结论黄芩素对HaCaT细胞光老化模型的保护作用主要通过降低ROS的量,阻断ERK信号通路,进而降低炎症因子的产生实现的。
目的:研究甘草苷抑制UVB诱导HaCaT细胞凋亡的机制。方法:以不同浓度的甘草苷作用于人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞),MTT法筛选药物的有效安全浓度;用30 m J/cm2的UVB照射HaCaT细胞,制备光老化模型,MTT法检测细胞增殖率;试剂盒法测定SOD、GSH-Px活性;流式细胞仪检测各组细胞中ROS含量和总凋亡率;Western Blot法检测各组细胞上清中Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷对HaCaT细胞无明显促增殖与抑制作用(P>0.05);甘草苷可提高SOD、GSH-Px活性,降低ROS含量和细胞凋亡率,抑制Bax蛋白的表达,促进Bcl-2蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:甘草苷能抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其机制可能与抗氧化损伤、抑制Bax蛋白的表达、促进Bcl-2蛋白的表达有关。
目的:研究甘草酸对UVB光老化人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)的保护作用及炎症因子影响。方法:采用30 m J/cm2的UVB照射Ha Ca T细胞,建立光老化模型;用10-7、10-6、10-5mol/L甘草酸处理光老化细胞24 h。MTT法检测细胞增殖率;采用试剂盒检测各组细胞SOD、GSH及CAT活性;Western Blot法检测各组细胞IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量。结果:与空白组相比,模型组GSH、SOD及CAT活性显著降低(P<0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量显著升高(P<0.01);与模型组相比,不同浓度甘草酸可使SOD、GSH及CAT活性显著升高(P<0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:甘草酸能保护UVB诱导的Ha Ca T细胞光老化,其机制可能与其抑制氧化损伤,减少炎症因子的产生有关。
目的:研究甘草酸对UVB(中波紫外线)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T细胞)凋亡的影响。方法:以不同浓度的甘草酸作用于Ha Ca T细胞,噻唑蓝比色(MTT)法筛选药物的有效安全浓度;用总剂量为30 m J/cm-2的UVB照射Ha Ca T细胞,制备光老化模型,MTT法检测细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞总凋亡率;实时定量PCR(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)法分别检测Caspase-3、Caspase-9 m RNA和蛋白表达水平。结果:1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L甘草酸为最佳有效安全浓度。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P<0.01),细胞总凋亡率显著显著升高(P<0.01),Caspase-3、Caspase-9 m RNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与UVB组比较,1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L甘草酸+UVB组细胞增殖率显著升高(P<0.01),细胞总凋亡率显著显著降低(P<0.05,P<0.01),Caspase-3、Caspase-9 m RNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:甘草酸能抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡,其机制与其降低细胞总凋亡率,抑制Caspase-3、Caspase-9 m RNA和蛋白的表达有关。
