熊震
- 作品数：15 被引量：37H指数：5
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人肝素酶RNA干扰对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响
- 研究背景及目的
恶性肿瘤是当前严重影响人类健康的最重要的疾病之一。而肿瘤的侵袭和转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤的早期诊断和早期治疗固然是肿瘤患者获得长期生存的主要途径,但许多就诊的患者多已发生转移,而常...
- 熊震
- 关键词：肿瘤肝素酶RNA干扰肝癌
- 文献传递
- hTERT基因修饰DC对不同类型肿瘤细胞的免疫杀伤效应研究
- 目的研究 hTERT 基因修饰树突状细胞(DC)诱导产生的细胞毒 T 淋巴细胞(CTLs)对不同肿瘤细胞系的免疫杀伤效应。方法采用密度梯度离心法分离并得到人外周血白细胞(PBMCs),利用 rhGM -CSF、rhIL-...
- 陈陵蔡永国房殿春汤旭东陈婷余松涛熊震罗元辉杨仕明
- 文献传递
- 人肝素酶RNAi序列的筛选及鉴定被引量：7
- 2007年
- 目的筛选及鉴定有效人肝素酶(heparanase,Hpa)RNA干扰(RNA interference)序列。方法通过在线网络软件选择3个Hpa RNAi的靶点,再设计1组无关序列作阴性对照。通过基因重组技术,把3个干扰片段及阴性对照片段分别克隆入质粒pGenesile-1,脂质体法稳定转染至HepG2肝癌细胞;经G418抗性筛选后各挑选2个阳性克隆进行扩大培养;Western blot检测不同克隆肝素酶蛋白的表达水平,并进一步采用RT-PCR验证筛选克隆肝素酶mRNA的表达水平。结果通过在线网络软件设计3个RNA干扰序列,分别为Hpa/RNAi-1:GGCTATCTCTTCTGTTCAA,Hpa/RNAi-2:TCCT-GTCCGTCACCATTGA,Hpa/RNAi-3:CTCAGTTGCTCCTGGACTA及阴性对照序列Hpa/RNAi-N:CTACCGTTGTATAGGTGT;测序证实克隆入pGenesil-1载体的3个干扰序列及阴性对照序列与设计序列完全一致;经G418抗性筛选后形成的阳性克隆采用Western blot检测其肝素酶蛋白的表达,结果表明3个干扰序列对HepG2细胞人肝素酶蛋白的表达均有抑制作用,其中Hpa/RNAi-1和Hpa/RNAi-3干扰链的抑制效果最好,分别达到57%和71%;RT-PCR检测结果亦表明Hpa/RNAi-1和Hpa/RNAi-3序列在mRNA水平对肝素酶有较好的抑制效果。结论成功筛选出有效的人肝素酶RANi序列。
- 熊震汤旭东房殿春陈婷余松涛陈陵罗元辉杨仕明
- 关键词：RNA干扰SIRNA肝癌
- 人肿瘤转移相关抗原肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及初步鉴定被引量：10
- 2007年
- 目的预测并鉴定肿瘤转移相关抗原肝素酶来源的HLA-A2.1限制性CTL表位。方法采用超基序、量化基序和分子模拟相结合的方法,对肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位进行预测,合成候选表位肽;利用T2细胞的特点,对合成的候选肽与HLA-A2.1分子进行亲和力分析,初步验证预测结果;利用标准51Cr释放试验检测特异性CTLs诱导活性。结果在所筛选的5个候选CTL表位中,Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)可在体外有效诱导肝素酶特异性CTLs的产生,对肝素酶阳性且HLA-A2阳性的KATO-Ⅲ细胞具有明显的杀伤效应。结论Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)有可能是肿瘤抗原肝素酶HLA-A2.1的限制性CTL表位。
- 陈婷万瑛汤旭东房殿春余松涛熊震罗元辉杨仕明
- 关键词：肝素酶表位分子模拟
- 小鼠肝素酶H-2Kb限制性CTL表位的实验鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的实验鉴定H-2Kb限制性小鼠肝素酶(mHpa)CTL表位。方法5条mHpa表位分别负载C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞,并进一步诱导产生表位特异性的效应细胞,采用标准4 h51Cr释放试验检测效应细胞对不同靶细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果5条mHpa CTL表位中,仅mHpa398-405和mHpa519-526可以诱导小鼠产生特异性CTL,对同来源的B16黑色素瘤细胞、Lewis肺癌细胞和EL-4淋巴瘤细胞具有明显的免疫杀伤效应,而对H-2Kb阴性的P815肥大细胞瘤细胞不具有免疫杀伤效应,进一步研究发现,上述多肽特异性CTL对自体淋巴细胞和DC细胞不具有杀伤效应,另一方面,mHpa398-405和mHpa519-526还可促进效应细胞分泌IFN-γ的能力。结论mH-pa398-405、mHpa519-526为小鼠肝素酶来源且受H-2Kb限制性CTL表位,小鼠体内可以诱导产生表位特异性的CTL反应。
- 汤旭东万瑛房殿春陈陵熊震余松涛师红磊郭军杨仕明
- 关键词：肝素酶抗原表位肿瘤疫苗细胞毒T淋巴细胞
- 肝素酶RNAi对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响被引量：4
- 2008年
- 目的利用筛选出的肝素酶有效干扰细胞株HepG2/RNAi/1和HepG2/RNAi/3研究肝素酶RNAi对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响。方法通过MTT实验、流式细胞技术、平皿克隆形成实验、Transwell侵袭实验、裸鼠成瘤实验分别检测HepG2肝癌细胞肝素酶RNAi后生长速度、单个细胞形成克隆能力、侵袭能力及成瘤能力的变化。结果MTT实验表明HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3组细胞增殖能力明显低于HepG2组和HepG2/RNAi/N组;流式细胞生长周期实验表明,与HepG2和HepG2/RNAi/N细胞相比,HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3 G0/G1期细胞比例增加,而增殖指数下降;平皿克隆形成实验表明HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3组单个细胞形成克隆的能力与HepG2组和HepG2/RNAi/N组相比显著降低[分别为(34±4)、(26±5)和(138±7)、(123±22),P<0.05)];Transwell体外侵袭实验表明,HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3细胞穿膜数较HepG2和HepG2/RNAi/N细胞穿膜数明显减少[分别为(85.1±9.1)、(78.1±10.4)和(182.2±9.7)(、183.5±9.3),P<0.05)];裸鼠成瘤实验显示,HepG2、HepG2/RNAi/N细胞成瘤率为100%,虽然HepG2/RNAi/1细胞成瘤亦为100%,但裸鼠皮下肿瘤体积较HepG2、HepG2/RNAi/N细胞明显缩小[分别为(0.099±0.030)和(0.585±0.135)(、0.690±0.099),P<0.01)],而HepG2/RNAi/3细胞裸鼠皮下未见肿瘤形成。结论肝素酶RNA干扰可以明显抑制HepG2肝癌细胞增殖速度、单个细胞克隆形成能力、体外侵袭能力以及裸鼠皮下成瘤能力。
- 熊震汤旭东房殿春余松涛陈陵师红磊罗元辉杨仕明
- 关键词：肝素酶RNAI肝癌
- 肝素酶CTL表位负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究被引量：5
- 2008年
- 目的研究肝素酶(Hpa)多肽疫苗体外能否诱发肝素酶特异性CTL反应,为肝素酶多肽疫苗的临床应用提供理论依据。方法5条HLA-A2限制性肝素酶抗原表位[Hpa(525-533)(PAFSYSFFV)、Hpa(353-361)(PLLSDTFAA)、Hpa(277-285)(KMLKSFLKA)、Hpa(400-408)(PLPDYWLSL)、Hpa(405-413)(WLSLLFKKL)]分别负载正常人外周血来源(PBMC)的树突状细胞(DC),诱导肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应,采用ELISPOT方法检测肝素酶表位肽负载的DC疫苗刺激的效应细胞IFN-γ的释放。结果5条肝素酶多肽表位中,只有Hpa(525-533)、Hpa(277-285)和Hpa(405-413)体外可以诱导肝素酶表位特异性CTL反应,对Hpa阳性且HLA-A2阳性的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有明显的杀伤效应,对HLA-A2阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但对转染了HLA-A2的HepG2细胞和转染了肝素酶质粒的MCF-7细胞恢复杀伤效应,对自体淋巴细胞不具有杀伤效应,进一步研究表明,Hpa(525-533)、Hpa(277-285)和Hpa(405-413)表位肽可以促进CTL细胞IFN-γ的释放。结论人肝素酶特异性抗原表位Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)不仅能激发机体特异性的抗肿瘤效应,而且还能诱导一个非特异性抗肿瘤的良性循环,这种肝素酶多肽疫苗具有广谱、高效、特异、安全的优点,为肝素酶表位多肽疫苗的临床应用提供了理论依据。
- 陈婷汤旭东万瑛房殿春梁光萍陈陵余松涛熊震师红雷罗元辉杨仕明
- 关键词：肝素酶CTL表位树突状细胞肿瘤疫苗
- HCCR-2干扰真核表达载体的构建及其稳定转染细胞系的建立被引量：5
- 2008年
- 目的构建HCCR-2干扰真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系。方法人工合成HCCR-2基因干扰序列并定向插入到RNAi真核表达载体pGenesil-1,通过测序鉴定。将干扰质粒用脂质体法转染HepG2细胞,经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。RT-PCR检测筛选克隆HCCR-2 mRNA的表达水平。结果测序表明HCCR-2干扰序列及读框完全正确,干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光。RT-PCR结果显示RNAi-H1、RNAi-H3序列对HCCR-2 mRNA有较好的抑制效果。结论成功构建了HCCR-2干扰真核表达载体,HCCR-2干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系的建立为进一步研究HCCR-2在肝癌细胞中的作用奠定了基础。
- 郭军房殿春杨仕明熊震汤旭东罗元辉
- 关键词：RNA干扰稳定转染
- 人肝素酶的RNA干扰靶点序列及其应用
- 本发明提供了人肝素酶的2个RNA干扰靶点序列，分别为：SEQ ID NO：1 GGCTATCTCTTCTGTTCAASEQ ID NO：2 CTCAGTTGCTCCTGGACTA。通过这2个靶点的RNAi作用，可明显抑制...
- 杨仕明熊震
- 文献传递
- 小鼠肝素酶H-2K^b限制性CTL表位预测及其MHC-I亲和力分析被引量：8
- 2007年
- 目的预测肿瘤转移相关基因肝素酶的CTL表位,为探索基于肝素酶的抗原表位的免疫治疗奠定基础。方法利用基于超基序、量化基序结合人工神经网络方案开发的H-2Kb限制性CTL表位预测软件,对小鼠肝素酶蛋白的CTL表位进行预测,然后人工合成相关待测表位肽,再对这些合成肽与MHC-I结合亲和力进行检测。结果采用机算机网络系统,预测了5条小鼠肝素酶抗原表位,即mHpa234~241(LGEDFVEL),mHpa351~358(FAAGFMWL),mHpa519~526(FSYGFFVI),mHpa386~393(VDENFEPL),mHpa398~405(LSLLFKKL),MHC亲合力实验表明,与阴性对照肽对比,随着预测肽浓度增加,H-2Kb的表达逐渐增加,与MHC-Ⅰ类分子的亲和力亦逐渐增强,当预测肽浓度达到30μmol/L时,其荧光系数(FI)均大于1.5。结论通过计算机软件预测到的5条小鼠肝素酶CTL表位与MHC-Ⅰ类分子均有较高的结合亲和力,为该表位的下一步体内鉴定及基于小鼠肝素酶抗原表位的肿瘤免疫治疗奠定基础。
- 汤旭东万瑛陈婷熊震陈陵余松涛罗元辉杨仕明
- 关键词：CTL表位
