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Stargardt病Ⅲ型致病基因ELOVL4在脂肪酸代谢中的功能研究: 2014年; 背景研究证实，超长链脂肪酸延伸酶4（ELOVIA）基因是Stargardt病的致病基因，且ELOVIA可能是c≥28的超长链脂肪酸的延伸酶，而常染色体显性遗传Stargardt病Ⅲ型（STGD3）的发病可能与视网膜中c≥28的超长链脂肪酸的代谢有关。探讨ELOVL4在STGD3发病中的作用及其与超长链脂肪酸代谢的关系有望对STGD3的治疗提供新的思路。目的探讨ELOVIA基因在STGD3发病和进展中的作用及机制。方法将腺病毒（Ad）转染重组病毒质粒36h的人胚肾293细胞（HEK293）以纯化病毒，构建携带ELOVIA基因和绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒载体并转人培养的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株（PCI2），将培养的PCI2细胞分成PCI2组、PCI2＋Ad5一GFP组和PCI2＋Ad5一ELOVL4组，根据分组情况分别将Ad-GFP和Ad-ELOVL4病毒质粒按1×10～2×10。噬斑形成单位（pfu／m1）的滴度加入含质量分数2％胎牛血清（FBS）的细胞培养液转导24h，采用实时定量PCR法（qRT—PCR）定量分析各组细胞中ELOVIAmRNA的相对表达量；采用Westernblot法检测细胞中ELOVL4蛋白的表达。分别在各组培养基中加入花生四烯酸（AA或20：4n6）、二十碳五烯酸（EPA或20：5n3）和二十二碳六烯酸（DHA或22：6n3），孵育48h后进行脂肪酸提取，通过气相色谱一质谱联用仪（GC-MS）分析各组细胞中超长链脂肪酸产物。结果PCI2＋Ad-ELOVL4组、PCI2＋Ad-GFP组和PCI2组间细胞中ELOVL4mRNA表达水平（ELOVIAmRNA／RPLl9mRNA）分别为0．833±0．138、0．027±0．002、0．024±O．002，3个组的总体差异有统计学意义（F=102．700，P=0．000），其中PCI2＋Ad5一ELOVL4组PCI2细胞中ELOVIAmRNA表达水平是PCI2组和PCI2＋Ad5-GFP组的30～40倍；Westernblot法检测结果证实，PCI2＋Ad5-ELOVIA-组PCI2细胞中ELOVL4蛋白呈阳性表达。GC-MS法检测发现PCI2＋Ad5-ELOVL4组PCI2细胞中有C28-C38多不饱和脂肪酸的合成，其中均以C34和C36多不饱�; 余曼陈波张瑞帆吴峥峥; 关键词：黄斑变性免疫印迹法实时定量PCR

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余曼

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