王平
- 作品数：17 被引量：51H指数：5
- 供职机构：南京军区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：江苏省科技支撑计划项目国家科技重大专项南京军区面上课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 检测囊虫循环抗原胶体金试条的研制与初步应用被引量：1
- 2009年
- 目的研制快速检测囊虫循环抗原(CA)的胶体金试纸法。方法以部分纯化囊虫抗原免疫BALB/c小鼠制备抗CA单克隆抗体(McAb),经筛选获得5株能稳定分泌McAb的杂交瘤细胞株。用制备的McAb两两配对,制备了囊虫CA免疫胶体金快速诊断试条。结果以1A5和1B6配对的试条对人体囊虫CA、囊虫CA标准抗原以及63份囊虫病患者血清、9份脑囊虫病患者脑脊液的检测结果均为阳性,对弓形虫病感染者、包虫病患者及非疫区献血员血清的检测结果均为阴性;与酶联免疫吸附试验(ELISA)的平行对比试验表明,试条检测敏感性与ELISA的敏感符合率为97.03%。结论研制的免疫胶体金诊断试条可用于人体囊虫病CA的特异性诊断和流行病学调查。
- 刘玉唐雨德王永山王长军王平冷欣彦
- 高血脂对囊虫病循环抗原检测结果的影响被引量：2
- 2007年
- 刘玉王永山王平王元伦
- 关键词：囊虫病循环抗原高血脂
- 新型布尼亚病毒环介导等温扩增可视化检测方法的建立被引量：5
- 2016年
- 目的应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立新型布尼亚病毒(SFTSV)可视化快速检测方法。方法针对新型布尼亚病毒的S片段基因设计LAMP引物建立LAMP方法。反应体系内加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应扩增指示剂,根据LAMP浊度仪扩增结果优化反应条件,根据HNB颜色变化进行结果判定,评估LAMP方法的特异性和灵敏性。结果建立的LAMP方法最低检出限为10拷贝/反应管;方法的特异性高,仅SFTSV反应管颜色由紫罗兰变为天蓝色,而汉坦病毒、新疆出血热、Q热、马尔堡、埃博拉病毒及阴性对照反应管均未发生变色反应;LAMP反应的最佳温度为63℃,其扩增效率高于常规PCR,试验过程仅需30min。结论建立的可视化SFTSV LAMP检测方法具有特异性强,灵敏性高,实验设备要求简单等优点,可用于SFTSV的快速检测。
- 吕恒钟璟浩张锦海王平王长军
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速可视化检测被引量：8
- 2013年
- 目的应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术和羟基萘酚蓝(Hydroxynaphthol blue,HNB)指示剂建立肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7快速可视化检测方法。方法针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料HNB作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,并评价检测方法的特异性和灵敏度。结果本方法最低检出限约为100拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅EHEC O157∶H7反应管HNB颜色由紫罗兰变成天蓝色,而肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAEC)、宋内志贺菌、福氏志贺菌均不发生变色反应;体系的扩增效率高于普通PCR,40 min内出结果。结论建立的基于颜色判定的EHEC O157∶H7 LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于EHEC O157∶H7现场快速检测。
- 吕恒张锦海顾海涛王平王长军王玉邦
- 关键词：环介导等温扩增
- 炭疽杆菌双重实时荧光PCR检测方法的建立被引量：6
- 2013年
- 目的建立同时检测炭疽杆菌capA基因、PA基因的双重实时定量荧光PCR方法,用于应对突发传染病疫情和流行病学调查、突发公共卫生事件应急处置的早期检测及防范生物恐怖威胁。方法设计和合成分别针对炭疽杆菌capA基因、PA基因的引物对和荧光双标记探针,构建质粒标准品,通过优化探针、引物浓度、反应体系试剂组分等参数,建立可同时检测capA基因、PA基因的双重实时荧光PCR方法,测试方法的灵敏度和特异性,并在实战检测中应用。结果双重实时荧光定量PCR的炭疽杆菌capA基因、PA基因检测的灵敏度分别可达到每反应5和50拷贝,并具有良好的特异性,在实战应用中亦经过考验。结论双重实时荧光定量PCR技术具有可以同时筛查、经济、快速、特异性强等优点,在炭疽杆菌检测方面有良好应用价值。
- 谭维国陈文琦吕恒刘玉王平陈凤娟王长军张锦海
- 关键词：炭疽杆菌
- 炭疽杆菌双重可视化LAMP检测方法的建立被引量：3
- 2016年
- 目的建立同时检测炭疽杆菌cap A基因、PA基因的双重环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,用于防范生物恐怖威胁。方法设计和合成分别针对炭疽杆菌cap A基因、PA基因的引物对,通过优化参数,建立可同时检测cap A基因、PA基因的双重LAMP方法,测试敏感性和特异性,并应用于模拟样本和实战检测。结果双重LAMP的检测cap A基因、PA基因的敏感性均可达到50模板拷贝每反应,并具有良好的特异性,在重大保障活动中得到检验。结论双重LAMP方法具有可以同时筛查、简单快速、灵敏度高等优点,在炭疽杆菌检测方面有良好应用前景。
- 刘玉陈文琦王平操敏韩一芳张琪张锦海王长军
- 关键词：炭疽杆菌环介导等温扩增
- 大肠埃希菌O157:H7环介导等温扩增可视化检测方法的建立被引量：10
- 2013年
- 目的建立肠出血性大肠埃希菌O157︰H7环介导等温扩增(LAMP)可视化快速检测方法。方法针对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157︰H7编码脂多糖rfbE基因保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,评价LAMP方法的特异性和灵敏性。结果建立的LAMP法对O157︰H7rfbE基因的最低检出限约为100copy/反应管,检测肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)、宋内志贺菌、福氏志贺菌均为阴性。体系的扩增效率较高,可在40min内出结果。结论建立的基于颜色判定的EHEC O157︰H7LAMP检测方法具有特异、灵敏,设备要求简单等特点,适用于EHEC O157︰H7的快速检测。
- 吕恒张锦海陈凤娟谭维国顾海涛王平王长军
- 关键词：H7
- 禽流感病毒H5N1抗原基因克隆及体外转录被引量：3
- 2010年
- 目的通过基因克隆和体外转录,获得H5N1禽流感病毒抗原基因的RNA全长片段,为病原学检测提供阳性定量标准品。方法设计H5N1禽流感病毒血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)及基质蛋白M(M)的基因克隆引物,RT-PCR从病毒RNA获得相应片段,分别连接至pGEM-T Easy质粒并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,用T7 RNA聚合酶进行体外转录,产物用DNase酶处理、纯化后测定浓度,RT-PCR验证。结果获得含H5N1禽流感病毒HA、NA、M全长基因序列的RNA片段,并可准确定量其拷贝数,质量浓度HA为503.9 ng/μL、NA为379.2 ng/μL、M为437.8 ng/μL。结论获得的RNA片段可作为H5N1禽流感病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。
- 张锦海王忠灿郑纪山王平鲁娟东吕恒王长军
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型克隆体外转录
- 人源和猪源血清中囊虫循环抗原的免疫与理化性质比较被引量：1
- 2007年
- 刘玉顾宏伟王平王永山周宗安
- 关键词：囊虫病循环抗原
- 体外转录法制备登革热1-4型病毒RNA片段
- 2010年
- 目的通过体外转录获得登革热1-4型病毒保守区基因的RNA片段,为核酸快速检测方法的建立和改进提供阳性定量标准品。方法设计登革热1-4型病毒基因保守区克隆引物,RT-PCR从病毒RNA获得相应片段,分别连接至质粒PGEM-T-easy上并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,用T7 RNA聚合酶进行体外转录,得到固定长度的RNA片段,DNase酶处理后测定浓度,梯度稀释后用RT-PCR验证。结果获得含登革热1-4型病毒靶基因序列的准确定量拷贝数的RNA片段,质量浓度分别为352.6 ng/μl、384.2 ng/μl、457.3 ng/μl、368.7 ng/μl,RT-PCR验证均扩增出相应目的条带。结论获得的RNA片段可作为登革热1-4型病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。
- 张锦海王忠灿吕恒顾海涛王平鲁娟东王长军
- 关键词：登革热病毒克隆T7启动子体外转录
