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H5N1禽流感病毒基因重组质粒PGEM-HA-NA-M的构建及应用: 目的：构建一种含H5N1禽流感病毒全长HA/NA/M基因的重组质粒,并为病原学检测提供阳性定量标准品。方法：设计H5N1禽流感病毒HA、NA及M抗原基因全长开放阅读框的克隆引物,提取H5N1禽流感病毒总RNA后用RT-P...; 张锦海吕恒王长军鲁娟东顾海涛王平; 关键词：禽流感病毒血凝素神经氨酸酶基质蛋白; 文献传递

H7N9禽流感病毒重组质粒构建及应用被引量：1: 2013年; 目的构建一种含H7N9禽流感病毒全长血凝素/神经氨酸酶/基质蛋白(HA/NA/M)基因的重组质粒,为核酸检测方法提供一种通用的阳性定量标准品。方法设计H7N9禽流感病毒HA、NA及M抗原基因全长开放阅读框的克隆引物,提取H7N9禽流感病毒总RNA后用实时荧光定量PCR获得相应片段,用3次酶切连接方法,依次插入到pGEM-T easy质粒,进行测序确认;线性化后的重组质粒用T7 RNA聚合酶进行体外转录,RNA转录产物纯化后测定浓度,用实时荧光定量PCR构建标准曲线进行验证。结果 HA、NA和M基因扩增片段大小分别约为1.7、1.3、1.1 kb,与预期相符;构建的重组质粒pGEM-HA-NA-M插入片段的测序结果与GenBank公布序列一致;由重组质粒体外转录获得同时含有H7N9禽流感病毒HA、NA、M全长开放阅读框序列的RNA片段质量浓度为399.5 ng/μL,梯度稀释后用3种实时荧光定量PCR方法均获得了良好的标准曲线。结论成功构建重组质粒pGEM-HA-NA-M,由此质粒体外转录获得的RNA片段可作为H7N9禽流感病毒核酸快速检测方法通用的阳性定量标准品。; 张锦海陈文琦胡丹王平吕恒刘玉陈凤娟任浩王长军; 关键词：血凝素神经氨酸酶基质蛋白标准品

自然疫源性疾病流行特点及暴发疫情处置要点被引量：10: 2010年; 分析了自然疫源性疾病流行现状和特点,从疫情监测与报告、核实暴发、疫源地调查、病因与趋势分析、控制措施等环节,对该类疾病暴发疫情的现场调查处置要点进行梳理,突出了现场处置的时效性和协同性;提出建立多部门、高效协作的监测网络,在现有疫情网络监测基础上,进一步涵盖宿主和媒介生物种群及其疾病传播强度等疾病生态学指标,对于该类疫病的早期预警和科学防控有重要意义。; 王长军张锦海顾海涛王平鲁娟东吕恒; 关键词：自然疫源性疾病

H5N1禽流感病毒抗原基因的体外转录及RNA标准品构建被引量：6: 2011年; 目的通过基因克隆和体外转录,获得H5N1禽流感病毒血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白M(M)基因的RNA片段,为病原学检测提供阳性定量标准品。方法设计H5N1禽流感病毒的HA、NA及M基因全长开放阅读框的克隆引物,提取H5N1禽流感病毒总RNA,用RT-PCR获得相应片段,分别连接至pGEM-Teasy质粒,转化宿主菌XL10-Gold,然后提取阳性克隆的重组质粒DNA,测序鉴定后用限制性核酸内切酶NdeI酶切线性化,用T7RNA聚合酶进行体外转录,产物用DNase酶处理、纯化后测定浓度,用实时荧光定量PCR构建标准曲线进行验证。结果获得含H5N1禽流感病毒HA、NA、M基因全长开放阅读框序列的准确定量拷贝数的RNA片段,质量浓度分别为503.9、379.2、437.8ng/μl。结论获得的RNA片段可作为H5N1禽流感病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。; 张锦海王忠灿郑纪山吕恒鲁娟东顾海涛王平王长军; 关键词：克隆体外转录

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王平