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穿心莲内酯对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌关键耐药蛋白PBP2a的抑制作用
2024年
本试验旨在为探究穿心莲内酯(andrographolide, AP)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)关键耐药蛋白青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a, PBP2a)的抑制作用。采用实时荧光定量PCR检测AP对PBP2a编码基因mecA的转录影响,通过在线软件SWISS-MODEL等对蛋白质结构进行分析,经PyMOL以及AutoDock Tools软件进行分子对接来探究AP与PBP2a结合的可能机制,运用动力学模拟来验证AP与PBP2a蛋白结合的可靠性,进一步原核表达PBP2a并制备其多克隆抗体,通过蛋白质免疫印迹检测AP作用下MRSAPBP2a蛋白含量的变化。结果显示:64μg/mL的AP即可显著下调mecA的转录水平,AP与PBP2a蛋白的GLU170、GLU239和THR238之间可以形成稳定的氢键作用力;成功表达并纯化获得38 kDa的PBP2a蛋白转肽酶区,且制备出的多克隆抗体可以与PBP2a蛋白特异性结合;随着AP浓度的升高,PBP2a的表达量逐渐降低。总之,本研究分子模拟提示AP对PBP2a蛋白存在抑制潜力,试验结果表明AP可以通过抑制mecA的转录进而抑制PBP2a表达,从而揭示了AP使MRSA对β-内酰胺类抗生素增敏的可能机制。
李彩霞刘盼盼陈晓慧罗小凤王桂琴
关键词:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2A穿心莲内酯分子模拟
妊娠晚期感染B族链球菌孕妇早产的危险因素及其pbp2x基因突变分析被引量:1
2024年
目的 分析某院感染B族链球菌(GBS)孕妇发生早产的危险因素及观察早产孕妇感染GBS的pbp2x基因突变情况。方法 选取2022年1月至2023年5月在该院分娩且感染GBS的孕妇199例,根据早产与否分为观察组(41例)和对照组(158例)。采用二分类logistic回归模型和受试者操作特征(ROC)曲线分析感染GBS的孕妇发生早产的危险因素;对早产孕妇的GBS样本进行pbp2x基因一代测序分析。结果 199例感染GBS孕妇中发生早产41例,发生率为20.6%。Logistic回归分析显示,年龄[比值比(OR)=1.151,P=0.004)]和口服葡萄糖耐量试验(OGTT)异常项数(OR=2.995,P<0.001)是感染GBS孕妇发生早产的独立危险因素。两危险因素联合预测早产的曲线下面积(AUC)为0.783,最佳敏感度为75.6%,特异度为69.0%,较单项危险因素预测价值高。pbp2x基因测序发现3个错义突变(1129G>A、1148T>G、1528A>G),未发现影响GBS对青霉素敏感性的基因突变。结论 年龄和OGTT异常项数是感染GBS孕妇发生早产的危险因素,两者联合预测的效能优于单项,早产孕妇感染的GBS中尚未发现影响青霉素敏感性的pbp2x基因突变。
文强王秀丁小莉胡芷晴徐志红
关键词:B族链球菌孕妇早产
Evaluating the performance of the Alere PBP2a SA Culture Colony Test with the Vitek 2 Antimicrobial Susceptibility Test Card System as reference standard in coagulase-negative Staphylococcus species
2024年
Background The Alere PBP2a SA Culture Colony Test is an FDA-cleared in vitro immunochromatographic assay for rapid detection of penicillin-binding protein2a(PBP2a)in Staphylococcus aureus.Methods We investigated the performance of the PBP2a SA Culture Colony Test with 78 coagulase-negative Staphylococcus(CoNS)isolates from different body sites,with the Vitek 2 Antimicrobial Susceptibility Test(AST)as a reference standard.Results The CoNS species were 62 S.epidermidis;6 S.lugdenensis;3 S.hominis;2 S.capitis;2 S.haemolyticus;and 1 each of S.simulans,S.auricularis,and S.warneri.Of the 78 CoNS isolates,68 showed concordance in the PBP2a IC assay and Vitek 2 AST.Discordance was seen for 10 S.epidermidis isolates,which showed negative in the PBP2a assay,despite oxacillin-resistance detection using the Vitek 2 AST(66.7%sensitivity and 100%specificity).All non-S.epidermidis CoNS were identified with 100%concordance using the PBP2a IC assay and Vitek 2 AST.Conclusion We demonstrated that,while the PBP2a IC assay has low sensitivity in determining the susceptibility of S.epidermidis to oxacillin,it highly accurately predicted the susceptibility of non-S.epidermidis CoNS to oxacillin.The diagnostic accuracy for non-S.epidermidis CoNS needs further assessment with more isolates to confirm our findings.
Tze Shien LoMichihiko GotoKimberly D.P.Hammer
关键词:STAPHYLOCOCCUS
以青霉素结合蛋白PBP2a为靶点计算机筛选黄连中抗菌活性成分
2024年
抗生素的滥用使得细菌耐药性不断增强,其中产生青霉素结合蛋白PBP2a是细菌耐药的原因之一,亟需寻求一种有效的治疗耐药细菌的物质.而中药作为我国传统的药用资源历史悠久、资源丰富,因此基于该抗药靶标从中药中筛选活性抗菌成分尤为必要.采用分子对接技术从黄连中筛选潜在的抗MRSA的天然药物,并初步对筛选出的活性化合物与PBP2a蛋白之间的相互作用机制展开探讨.获取PBP2a蛋白3D结构(PDB ID:5M18),并用AutoDock Vina进行分子对接,以原配体自由能为参考进行筛选,筛选出45个候选化合物,发现棕榈苷A、黄柏酮、柠檬苦素对PBP2a蛋白具有较强的结合作用,这为寻找新型抗菌药提供了理论基础.
张椰莉李嘉晨李娜
关键词:分子对接黄连青霉素结合蛋白
靶向PBP2a的非天然核酸适配体获取方法
本发明公开靶向PBP2a的非天然核酸适配体获取方法。该方法为筛选靶向PBP2a非天然核酸适配体的过程中,第二轮以后的转录文库制备方法主要采用5’‑磷酸化扩增引物对筛选到的XNA序列反转录产物做PCR扩增,该引物与模板3’...
陈庭坚刘巧玲彭乐丽张瑞敏杜宇辉
Discovery of potent anti-MRSA components from Dalbergia odorifera through UPLC-Q-TOF-MS and targeting PBP2a protein through in-depth transcriptomic,in vitro,and in-silico studies
2024年
Methicillin-resistant Staphylococcus aureus(MRSA)is an important pathogen casting dire shadow over global human wellbeing[1].Rising antibiotic resistance in MRSA led to research into plant-derived anti-microbial agents.Approximately 119 compounds from 90 plants were recognized as potent anti-bacterials[2].Dalbergia odorifera,a traditional Chinese plant,has demonstrated anti-tumor,anti-microbial,anti-inflammatory,and cardiovascular protective effects[3].Limited studies have explored D.odorifera flavonoids'inhibitory activity against MRSA.Transcriptomics,a high-throughput method,aided in comprehending plant antibacterial therapy by generating data for gene expression,target identification,and pathway analysis[4].Consequently,our study aimed to assess D.odorifera's anti-MRSA effects and reveal its material foundation and antibacterial mechanism by ultra-performance liquid chromatography coupled with quadrupole time of flight mass spectrometry(UPLC-Q-TOF-MS),and transcriptomic analysis,in vitro,and in-silico studies.
Jiajia WuSyed Shams ul HassanXue ZhangTao LiAbdur RehmanShikai YanHuizi Jin
柯里拉京在制备催化关键残基暴露试剂、PBP2a别构位点抑制剂及联合抑菌剂中的应用
本发明提供了柯里拉京在制备催化关键残基暴露试剂、PBP2a别构位点抑制剂及联合抑菌剂中的应用。本发明提供了柯里拉京在制备催化关键残基暴露试剂中的应用,所述关键残基为PBP2a蛋白上的关键氨基酸残基丝氨酸403。本发明涉及...
向华马红霞曲桂娟裴志花王大成刘婧瑜
基于PBP2a特异性识别的电化学免疫传感器检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
2023年
目的构建一种高性能的电化学免疫传感器用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测。方法制备MWCNT-PDA-AuNPs纳米复合物修饰至金电极表面,将MRSA标志蛋白PBP2a的抗体连接于纳米复合物表面,用牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异性位点,得到一种检测MRSA的电化学免疫传感器。通过对传感器构建过程关键因素的考察确定最优条件,考察其线性范围及检出限,最后对传感器性能进行评价。结果通过CV、EIS表征分析确定传感器的成功构建;明确最优构建条件为:MWCNT-PDAAuNPs混合比例为1∶2,材料干燥温度为37℃,抗体孵育时间为1 h,样本孵育时间为30 min;MRSA20 CFU/ml~2.0×10^(7)CFU/ml范围内浓度对数值与DPV峰电流值呈良好的线性关系,回归方程为I(μA)=-6.72lgC+84.26(R^(2)=0.9878),检出限为1 CFU/ml;传感器不易被杂质蛋白干扰,其对低、中、高浓度MRSA重复测定结果RSD分别为4.18%、3.59%、4.38%(n=8),保存20 d内,传感器电信号不低于初始的92%;传感器对低、中、高浓度MRSA样本检测回收率与平板计数法基本一致。结论该电化学免疫传感器构建简便,检测迅速、准确,灵敏度高,具有良好的特异性、重复性和稳定性,可以作为MRSA临床检测的备选方法。
曹宇段浩张珊珊李郭成李海波刘明高英英
关键词:电化学免疫传感器MRSAPBP2A
穿心莲内酯对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌关键耐药蛋白PBP2a的抑制作用
青霉素结合蛋白(PBPs)是细菌细胞壁形成过程中的关键膜蛋白。β-内酰胺类抗生素可以结合PBPs,从而影响细胞壁肽聚糖的生物合成,起到杀菌作用。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为典型的耐药菌,其产生的PBP2a与抗...
李彩霞
关键词:青霉素结合蛋白2A穿心莲内酯免疫印迹多克隆抗体制备
一种PBP2a单克隆抗体及其制备方法和应用
本发明公开了一种PBP2a单克隆抗体及其制备方法和应用,其中PBP2a单克隆抗体制备过程包括:合成金黄色葡萄球菌PBP2a基因,表达纯化PBP2a蛋白,以重组PBP2a蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞...
邬玉兰汪涛刘丽陈钰羊林启辉任燕许少坚