南京农业大学食品科技学院酶工程研究室
- 作品数：5 被引量：30H指数：3
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 重组鱼腥藻脂肪氧合酶基因的克隆表达、分离纯化及活性分析
- 克隆鱼腥藻PCC7120基因组中脂肪氧合酶(ana-LOX)基因，对该功能基因进行了定点突变研究，确定了ana-LOX的最短功能基因长度，构建原核重组表达载体，对重组ana-LOX进行了分离纯化和性质研究。从GenBan...
- 张充周孝伟吕凤霞别小妹陶婷婷应琦陆兆新
- 关键词：脂肪氧合酶克隆表达定点突变分离纯化活性分析
- 文献传递
- 重组鱼腥藻脂肪氧合酶基因的克隆表达、分离纯化及活性分析被引量：10
- 2012年
- 克隆鱼腥藻PCC7120基因组中脂肪氧合酶(ana-LOX)基因,对该功能基因进行了定点突变研究,确定了ana-LOX的最短功能基因长度,构建原核重组表达载体,对重组ana-LOX进行了分离纯化和性质研究。从GenBank中搜索到鱼腥藻PCC7120基因组中含有LOX基因,通过序列分析和比对,发现LOX功能基因位于双功能酶AOS(单加氧酶)-LOX的C端,通过定点突变研究,证实了ana-LOX活性中心位点为His197、His202、His369、Asn373和Ile455。通过逐步缩短基因长度的策略,获得ana-LOX基因的最短功能基因长度为1 254 bp。构建的表达载体pET-32a/ana-LOX转化入BL21(DE3)宿主内,在低温16℃条件下的诱导表达,重组脂肪氧合酶活力可达6 750 U/mL。表达产物通过Ni-NTA亲和柱进行分离纯化,比活达到11.4×104U/mg蛋白,酶活回收率为60.89%。重组ana-LOX最适反应温度45℃,最适反应pH 6.0,在常温下具有较好的稳定性,金属离子Fe2+、Mg2+、Ca2+对该酶存在明显的激活作用,而Fe3+和Cu2+对该酶有强烈的抑制作用。重组ana-LOX能够改善面团的显微结构。该研究获得了高效表达重组ana-LOX,为实现其在食品加工中的应用提供了参考。
- 张充周孝伟吕凤霞别小妹陶婷婷应琦陆兆新
- 关键词：克隆表达定点突变分离纯化活性分析
- 脂肪酶催化猪油合成L-抗坏血酸脂肪酸酯工艺条件被引量：5
- 2010年
- 研究一种L-抗坏血酸脂肪酸酯酶法合成的新途径。以廉价的猪油和L-抗坏血酸作为反应底物,探讨酶法合成L-抗坏血酸脂肪酸酯的工艺条件。结果表明,在该酶促反应中,混合有机溶剂体系中底物转化率高于相应纯有机溶剂体系中的转化率,最佳反应体系为30%叔戊醇:70%异辛烷(V/V)。研究各反应因素对转化率的影响,确定最适反应条件为底物L-抗坏血酸与复合猪油甲酯的物质的量比为1:10、酶量10%、温度55℃、反应时间24h,转化率可达到(52.7±2.8)%。
- 张宇吕凤霞赵海珍刘建伟别小妹陆兆新
- 关键词：脂肪酶猪油酶法合成
- 超声辅助脂肪酶催化L-抗坏血酸脂肪酸酯的合成被引量：16
- 2011年
- 采用猪油和抗坏血酸为原料,通过单因素试验和正交试验,研究超声作用对酶促转酯化反应合成抗坏血酸脂肪酸酯的影响,并确定其最佳反应条件。结果表明,最佳反应条件为:叔戊醇为溶剂,Novozym 435用量20%(抗坏血酸质量百分比),抗坏血酸与猪油物质的量的比1:3,超声功率350W,超声频率59kHz,反应时间9h,在此条件下,抗坏血酸脂肪酸酯转化率达到88.00%。超声处理不仅可以提高产物产率(从71%提高到88%),还可以大大缩短反应时间(从32h降低到9h)。超声条件下Novozym 435有良好的操作稳定性,反应6批次后,酶活还保持在比较高的水平。
- 彭杨穆青魏微熊园刘建伟陆兆新吴涛赵海珍
- 关键词：猪油脂肪酶超声波转酯化
- 内生多粘类芽胞杆菌纤溶酶基因PPFE-I在大肠杆菌中融合表达及活性分析被引量：2
- 2010年
- 以内生多粘类芽胞杆菌EJS-3基因组DNA为模板,PCR扩增PPFE-I基因,并克隆到pMD19-T载体上,构建克隆载体pMD-PPFE-I,经测序正确后,将PPFE-I基因克隆至表达载体pET-DsbA上构建重组表达质粒pET-DsbA/PPFE-I,将其转化至E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下实现了融合蛋白DsbA-PPFE-I的表达,表达产物酶活性达228IU/mL。表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。SDS-PAGE电泳检测表明融合蛋白主要以可溶形式表达,占菌体总蛋白的18.4%。Western blotting结果表明在相应分子量处有一条特异性条带,证实该蛋白为DsbA-PPFE-I融合蛋白。表达产物通过Ni亲和柱、凝血酶酶切及Sephadex G-100等步骤进行分离纯化,并用MALDI-TOF质谱对重组酶进行了鉴定。纯化后的表达产物在纤维蛋白平板上表现出明显的纤溶活性。
- 吕凤霞陆兆新别小妹林谦张充曹林郭瑶汤彦翀
- 关键词：内生菌纤溶酶
