周益强
- 作品数：12 被引量：24H指数：3
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- PHA-PEG细胞融合法融合胶质瘤细胞及其在细胞增殖中的作用研究
- 目的 通过PHA-PEG 细胞融合的方法获得胶质瘤融合细胞,进而研究细胞融合在胶质瘤增殖中的作用.方法 通过慢病毒感染分别将胶质瘤C6 细胞标记绿色荧光及红色荧光,通过PHA-PEG 融合方法获得胶质瘤溶瘤细胞,进一步通...
- 米蕊芳金贵善周益强徐恒周程森刘福生
- PDGF-B在脑胶质瘤中的研究进展被引量：2
- 2014年
- 胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤,约占颅内原发性肿瘤的45％,传统的手术、放疗、化疗等方法并未明显提高胶质瘤病人的预后.因此迫切的需要一些新的治疗方法以提高胶质瘤的临床疗效.近几年来,随着对血小板源性生长因子（platelet derived growth factors,PDGFs）家族研究的增多,PDGF-B在脑胶质瘤中的表达情况、信号通路、肿瘤血管生成以及基因甲基化方面受到越来越多的关注,以PDGF-B及其受体作为靶点调节胶质瘤相关信号通路或者抑制肿瘤血管生成等,可能成为胶质瘤治疗的新途径,本文将在上述几方面展开综述.
- 周益强金贵善刘福生
- 关键词：PDGF-B脑胶质瘤抑制肿瘤血管生成血小板源性生长因子原发性肿瘤中枢神经系统
- VP22-CD基因工程化载体对胶质瘤细胞体外杀伤作用的研究
- 2016年
- 目的构建CD以及VP22-CD基因工程化载体，并探讨其在体外对胶质瘤细胞的杀伤作用。方法利用聚合酶链式反应（PCR）得到CD以及VP22基因片段；利用In—fusion基因克隆方法将得到的基因片段插入到pEGFP—N1载体中，构建CD以及VP22-CD基因工程化载体；利用脂质体转染的方法将构建的基因工程化载体转染到胶质瘤细胞c6及U87细胞中，并通过体外光镜及荧光显微镜观察转染率；利用MTT比色法评价加入前药5-氟胞嘧啶后对转染后胶质瘤细胞的杀伤率。结果（1）将CD基因或VP22-CD融合基因插入到pEGFP—CD载体中，构建得到pEGFP—CD以及pEGFP—VP22-CD载体。（2）pEGFP—CD及pEGFP—VP22-CD载体可转染入c6或U87胶质瘤细胞，转染率分别为2．5％和3．7％以及2．0％和4．1％。（3）在c6或U87细胞中转染pEGFP—CD或pEGFP-VP22．CD载体并加入前药5．氟胞嘧啶后，细胞的存活率分别为（30．36±0．63）％和（11．75±1．01）％以及（28．78±3．62）％和（18．26±2．27）％，与转染pEGFP—N1组相比差异均有统计学意义（均P〈0．05）。（4）在C6或U87细胞中加入前药5-氟胞嘧啶后，转染pEGFP—VP22-CD组与转染pEGFP—CD组相比差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论CD／5-FC系统在体外对恶性胶质瘤细胞具有显著的杀伤作用和旁观者效应；并且穿梭蛋白VP22可进一步促进系统对细胞的杀伤作用。
- 米蕊芳金贵善张俊文周益强徐恒周程森刘福生
- 关键词：神经胶质瘤CD/5-FC系统旁观者效应
- 人脑胶质瘤干细胞分化为血管内皮细胞的实验研究被引量：4
- 2013年
- 目的探讨体内外原代培养的人脑胶质瘤干细胞（GSCs）与胶质瘤新生血管内皮细胞的关系。方法新鲜高级别（WHOⅢ级、Ⅳ级）的人脑胶质瘤标本经原代培养获取GSCs，免疫组化法检测其肿瘤干细胞及干细胞标记物Nestin的表达；鉴定后的GSCs经低氧诱导，免疫荧光法检测其诱导分化后内皮细胞标记物CD31、CD144和胶质瘤细胞标记物GFAP的表达，RT—PCR和Western—blot法检测其CD31的表达；建立胶质瘤干细胞皮下荷瘤裸鼠模型，免疫组化技术检测模型中人来源的CD31的表达。结果（1）悬浮生长的胶质瘤干细胞球样细胞经免疫组化鉴定Nestin表达阳性；（2）低氧诱导后的GSCs能够表达CD31、CD144，有些细胞能够同时表达CD144和GFAP；（3）RT—PCR检测发现GSCs在诱导前后都有CD31mRNA的表达，而Western—blot检测到只有诱导后的GSCs有CD31蛋白的表达；（4）胶质瘤干细胞荷瘤裸鼠模型的肿瘤组织中部分微血管抗人CD31抗体染色阳性。结论胶质瘤干细胞不仅在体外低氧条件下可分化为内皮细胞，在体内微环境条件下同样可分化为血管内皮细胞，并参与胶质瘤新生组织的血液供应。
- 聂秀涛金贵善米蕊芳张国滨谢坚曹泽周益强董程远刘福生
- 关键词：胶质瘤干细胞内皮细胞低氧诱导
- shRNA干扰技术在脑胶质瘤细胞TGFβ2／Smads通路中的作用被引量：3
- 2014年
- 目的利用shRNA干扰技术抑制恶性脑胶质瘤细胞TGFβ2／Smads通路中Smad2／3基因的表达，探讨其在恶性胶质瘤细胞增殖中的作用。方法将表达Smad2／3shRNA干扰序列的特异性质粒及阴性对照质粒用脂质体转染法，分别转入到恶性脑胶质瘤细胞U251中。应用Real—TimePCR和Westernblot法分别检测细胞中Smad2／3基因mRNA和蛋白的表达；转染后的细胞经TGFl32（＋／-）处理，采用CCK-8法评价两组的增殖率。结果（1）两种特异性质粒能够分别下调细胞中Smad2／3基因的表达（P=0．01）；（2）Smad2／3的表达量在Smad3／2表达下调组中明显高于对照组（P=0．018，P=0．008）；（3）Smad2／3表达下调组的细胞增值率明显高于对照组（P=0．001）；（4）Smad3表达下调的细胞，在TGFl32（＋／-）处理的两组中增殖率差异无统计学意义（P=0．258）。结论在恶性胶质瘤细胞U251中，Smad2／3基因表达的下调能促进细胞的增殖，而TGFl32介导的细胞增殖依赖于TGFl32／Smad3通路；同时Smad2／3基因的表达下调增强了Smad3／2基因的表达。
- 董程远米蕊芳金贵善周益强聂秀涛张国滨张晋刘福生
- 关键词：RNA干扰神经胶质瘤转化生长因子Β2
- 支链氨基酸氨基转移酶1在恶性胶质瘤中的表达及意义被引量：5
- 2015年
- 目的 探讨不同级别神经胶质瘤中支链氨基酸氨基转移酶1（BCAT1）的表达水平及其与肿瘤增殖的关系.方法 收集首都医科大学附属北京天坛医院神经外科2012至2013年手术切除的54例神经胶质瘤标本,免疫组化检测54例神经胶质瘤中BCAT1和Ki-67的表达水平;实时荧光定量PCR检测BCAT1基因的表达程度.结果 （1）BCAT1表达水平随着病理分级的增高而增多（P＜0.05）;（2）其表达程度与Ki-67表达呈正相关（r=0.825,P＜0.01）;（3）随着胶质瘤恶性程度的增高,BCAT1 mRNA的表达增高,WHO Ⅰ级（0.5587±0.2038）和Ⅱ级（1.3499±0.3964）之间的表达差异具有统计学意义（P＜0.01）,WHOⅡ级和Ⅲ级之间的表达差异具有统计学意义（P＜0.01）,WHOⅢ级（2.0004±0.4025）和Ⅳ级（3.0656±0.4955）之间的表达差异具有统计学意义（P＜0.01）.结论 BCAT1与神经胶质瘤恶性程度呈正相关,恶性程度越高其BCAT1表达水平越高.
- 张国滨张晋徐恒周周益强程森刘福生
- 关键词：神经胶质瘤细胞增殖
- 内皮抑素和血管生成抑素融合基因修饰的单纯疱疹病毒对胶质瘤干细胞杀伤作用的实验研究被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨内皮抑素和血管生成抑素（Endo-Angio）融合基因修饰的单纯疱疹病毒（VAE）对胶质瘤干细胞（GSCs）荷瘤裸鼠胶质瘤的溶瘤作用.方法 采用人脑胶质瘤标本经原代培养获得稳定传代的GSCs,构建裸小鼠脑内原位GSCs移植瘤模型,瘤内注射VAE治疗,通过MRI观察VAE对GSCs荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响,RT-PCR和Western blot检测Endo-Angio融合蛋白的表达,免疫组化CD31染色检测其对微血管密度（MVD）的影响;观察病毒处理后荷瘤裸小鼠的生存情况.结果 （1）从36例胶质母细胞瘤标本中培养出6例稳定传代的GSCs,能够表达CD133,具有自我更新和多向分化能力.（2）VAE感染GSCs荷瘤裸鼠10d后,有Endo-Angio融合基因和蛋白的表达,该融合蛋白使MVD明显降低（p＜0.05）.（3）MRI检查发现VAE感染GSCs荷瘤裸鼠后,颅内肿瘤体积明显减小.（4）GSCs荷瘤裸鼠感染VAE后生存时间明显延长（P＜0.05）.结论 VAE能感染GSCs荷瘤裸鼠并表达Endo-Angio融合蛋白,杀伤GSCs的同时抑制肿瘤血管生成,为脑胶质瘤病毒-基因治疗开辟了新的途径.
- 张国滨金贵善聂秀涛米蕊芳周益强董程远张晋刘福生
- 关键词：干细胞内皮抑素溶瘤病毒
- 血小板源性生长因子B及其基因启动子区甲基化在脑胶质瘤中的表达及意义被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨脑胶质瘤中血小板源性生长因子B（PDGF-B）表达水平及其基因启动子区甲基化程度与肿瘤增殖的关系。方法运用免疫组化检测54例脑胶质瘤中PDGF-B、磷酸化Smad2（P-Smad2）和Ki-67的表达水平；运用焦磷酸测序检测上述54例脑胶质瘤中PDGF-B启动子区甲基化程度。结果（1）PDGF-B表达水平随着病理分级的增高而增多（P〈0．05）；（2）PDGF-B表达分别与Ki-67、P-Smad2表达呈正相关（r=0．839，P〈0．001）（r=0．802，P〈0．001），与PDGF-B甲基化水平呈负相关（r=-0．817，P〈0．001）；（3）在低级别和高级别胶质瘤中，PDGF-B甲基化水平的差异具有统计学意义（P=0．001）。结论PDGF-B甲基化水平越低，其蛋白表达越高，则胶质瘤恶性程度及增殖活性越高。
- 周益强金贵善米蕊芳董程远张晋刘福生
- 关键词：神经胶质瘤基因甲基化焦磷酸测序血小板源性生长因子B
- 神经胶质瘤干细胞向内皮细胞分化的差异基因表达谱的分析被引量：2
- 2015年
- 目的 检测并分析胶质瘤干细胞（GSCs）低氧诱导分化为内皮细胞过程的差异基因表达谱的关键通路和基因,为恶性胶质瘤的治疗寻找新的靶基因.方法 从U87胶质瘤细胞株中提取GSCs细胞并进行免疫荧光鉴定;将GSCs在水凝胶上低氧诱导分化,并对分化后的内皮细胞进行免疫荧光鉴定;收集并提取细胞总RNA,用基因芯片检测分化前、后的细胞差异表达基因,进而分析差异基因的显著靶向性功能和差异基因参与的信号转导通路,从而筛选出关键调控信号通路和基因.结果 提取的GSCs表达CD133、Nestin、SOX2等干细胞标志物;低氧诱导5d后细胞表达CD31、CD34两种内皮细胞标志物;差异基因表达谱存在481个上调基因及245个下调基因（差异倍数＞2）,筛选出转化生长因子β（TGF-β）信号通路、脂肪酸合酶（FASN）、脯氨酰-4-羟化酶亚基α1（P4HA1）等多个有意义的通路和基因（均P ＜0.01）.结论 U87细胞中提取的GSCs可经体外低氧诱导分化为内皮细胞,TGF-β信号通路、FASN及P4HA1可能成为胶质母细胞瘤具有前景的治疗靶点.
- 张晋金贵善米蕊芳周益强房绍伟朱树干刘福生
- 关键词：神经胶质瘤干细胞研究内皮细胞细胞低氧基因芯片
- 人胶质瘤自杀基因细胞系的建立及其在胶质瘤治疗研究中的应用
- 2016年
- 目的构建CD基因工程化人脑胶质瘤细胞并在此基础上进行胶质瘤治疗研究。方法通过In-fusion基因克隆的方法,构建携带CD基因慢病毒载体;通过293T细胞体外包装获得慢病毒,并测定病毒效价;通过慢病毒体外感染细胞获得CD基因工程化人脑胶质瘤细胞;通过流式分选获得基因稳定表达细胞;通过CCK-8评价加入5-FC前药和(或)HSV-1后细胞存活率。结果成功构建p LVX-CD-IRES-Zs Green1慢病毒载体并体外包装获得相应慢病毒;慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后获得携带CD基因的阳性细胞,并通过体外培养30天后流式分选获得稳定阳性细胞;加入前药5-FC和(或)HSV-1后对携带CD基因的U87细胞杀伤作用明显(P<0.01),其中5-FC联合HSV-1对胶质瘤细胞作用更加高效(P<0.01)。结论成功获得携带CD基因的人脑胶质瘤细胞;前药5-FC联合HSV-1对胶质瘤细胞具有更加高效的杀伤疗效。
- 米蕊芳金贵善张俊文周益强徐恒周程森刘福生
- 关键词：胶质瘤CD基因HSV-1U87细胞
