金贵善
- 作品数：35 被引量：104H指数：5
- 供职机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 荧光探针及流式分选法追踪胰腺癌细胞增殖的研究被引量：2
- 2016年
- 目的应用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(5,6-carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)荧光探针及流式分选的方法追踪胰腺癌细胞增殖情况。方法应用低血清培养法(0.5%)对细胞进行细胞周期同步化;利用CFSE染色追踪胰腺癌全基因组突变文库细胞增殖;并于一定的时间点,应用流式分选法分选增殖速度减慢细胞群;通过CCK-8法检测分选前后的细胞增殖曲线。结果 CFSE探针可均匀染色胰腺癌细胞,呈现较强的绿色荧光;在CFSE荧光探针染色后的不同时间点(0、48、96及144h),胰腺癌细胞荧光强度呈现逐级衰减趋势;应用细胞饥饿法对细胞进行同步化后,细胞呈现更好的同步化衰减趋势;在一定的荧光衰减时间点(144h),通过流式分选从细胞突变文库中获得了胰腺癌增殖减慢细胞群;CCK-8实验显示,相对于分选前的细胞,分选出的荧光强度强的胰腺癌细胞群增殖速度明显减慢(P=0.006)。结论 CFSE荧光探针可很好追踪胰腺癌细胞增殖,结合流式分选法可获得肿瘤突变文库中的增殖减慢细胞群。
- 米蕊芳潘春晓张俊文刘福生金贵善
- 关键词：胰腺癌荧光探针
- PDGF-B在脑胶质瘤中的研究进展被引量：2
- 2014年
- 胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤,约占颅内原发性肿瘤的45％,传统的手术、放疗、化疗等方法并未明显提高胶质瘤病人的预后.因此迫切的需要一些新的治疗方法以提高胶质瘤的临床疗效.近几年来,随着对血小板源性生长因子（platelet derived growth factors,PDGFs）家族研究的增多,PDGF-B在脑胶质瘤中的表达情况、信号通路、肿瘤血管生成以及基因甲基化方面受到越来越多的关注,以PDGF-B及其受体作为靶点调节胶质瘤相关信号通路或者抑制肿瘤血管生成等,可能成为胶质瘤治疗的新途径,本文将在上述几方面展开综述.
- 周益强金贵善刘福生
- 关键词：PDGF-B脑胶质瘤抑制肿瘤血管生成血小板源性生长因子原发性肿瘤中枢神经系统
- SiRNA干扰BTN3A3对脑胶质瘤细胞凋亡作用的研究被引量：1
- 2020年
- 目的探讨采用siRNA干扰嗜乳脂蛋白亚家族成员A3(BTN3A3)对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法实验采用胶质瘤细胞株(HS683、U251)以及原代胶质瘤细胞,均设立阴性对照组(NC组)以及转染不同序列siRNA的Si-1组(转染1序列)和Si-2组(转染2序列)。应用蛋白质免疫印迹方法分析不同胶质瘤细胞株、小胶质细胞株(HMC3)中BTN3A3的表达情况。通过转染siRNA敲减BTN3A3后,采用流术细胞术分析各细胞株中细胞凋亡的变化情况。分离培养手术切除的脑胶质瘤组织,获得原代胶质瘤细胞后,采用蛋白质免疫印迹方法分析原代细胞中BTN3A3的表达水平;通过转染siRNA敲减BTN3A3后,采用流式细胞术分析原代细胞的细胞凋亡变化情况。结果 BTN3A3在HS683(1.12±0.03)和U87-MG细胞(1.08±0.05)中的表达水平显著高于HMC3细胞(0.66±0.02)(均P<0.01)。U251细胞Si-1组、Si-2组BTN3A3的表达水平分别为0.11±0.01、0.12±0.01,均低于NC组(0.21±0.01)(均P<0.01);HS683细胞Si-1组、Si-2组BTN3A3的表达水平分别为0.77±0.03、0.78±0.04,均低于NC组(1.01±0.03)(均P<0.01)。敲减BTN3A3后,与NC组相比,HS683细胞的早期凋亡比率(NC组:31.6%,Si-1组:53.7%,Si-2组:63.3%)、U251细胞的晚期凋亡比率(NC组:10.4%,Si-1组:18.9%,Si-2组:26.5%)升高。BTN3A3在原代胶质瘤细胞中的表达水平高于HMC3细胞(分别为0.75±0.07和0.55±0.06,P<0.05)。采用siRNA敲减后,原代胶质瘤细胞中BTN3A3的表达水平降低(NC组:0.90±0.01,Si-1组:0.44±0.01,Si-2组:0.49±0.02,Si-1组和Si-2组与NC组相比,均P<0.01),晚期细胞凋亡比率升高(NC组:12.3%,Si-1组:22.6%,Si-2组:18.2%)。结论采用siRNA干扰BTN3A3可促进胶质瘤细胞株、原代胶质瘤细胞的凋亡。
- 张梦梦张俊文米蕊芳金贵善刘福生
- 关键词：神经胶质瘤细胞凋亡
- VP22-CD基因工程化载体对胶质瘤细胞体外杀伤作用的研究
- 2016年
- 目的构建CD以及VP22-CD基因工程化载体，并探讨其在体外对胶质瘤细胞的杀伤作用。方法利用聚合酶链式反应（PCR）得到CD以及VP22基因片段；利用In—fusion基因克隆方法将得到的基因片段插入到pEGFP—N1载体中，构建CD以及VP22-CD基因工程化载体；利用脂质体转染的方法将构建的基因工程化载体转染到胶质瘤细胞c6及U87细胞中，并通过体外光镜及荧光显微镜观察转染率；利用MTT比色法评价加入前药5-氟胞嘧啶后对转染后胶质瘤细胞的杀伤率。结果（1）将CD基因或VP22-CD融合基因插入到pEGFP—CD载体中，构建得到pEGFP—CD以及pEGFP—VP22-CD载体。（2）pEGFP—CD及pEGFP—VP22-CD载体可转染入c6或U87胶质瘤细胞，转染率分别为2．5％和3．7％以及2．0％和4．1％。（3）在c6或U87细胞中转染pEGFP—CD或pEGFP-VP22．CD载体并加入前药5．氟胞嘧啶后，细胞的存活率分别为（30．36±0．63）％和（11．75±1．01）％以及（28．78±3．62）％和（18．26±2．27）％，与转染pEGFP—N1组相比差异均有统计学意义（均P〈0．05）。（4）在C6或U87细胞中加入前药5-氟胞嘧啶后，转染pEGFP—VP22-CD组与转染pEGFP—CD组相比差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论CD／5-FC系统在体外对恶性胶质瘤细胞具有显著的杀伤作用和旁观者效应；并且穿梭蛋白VP22可进一步促进系统对细胞的杀伤作用。
- 米蕊芳金贵善张俊文周益强徐恒周程森刘福生
- 关键词：神经胶质瘤CD/5-FC系统旁观者效应
- 人脑胶质瘤干细胞分化为血管内皮细胞的实验研究被引量：4
- 2013年
- 目的探讨体内外原代培养的人脑胶质瘤干细胞（GSCs）与胶质瘤新生血管内皮细胞的关系。方法新鲜高级别（WHOⅢ级、Ⅳ级）的人脑胶质瘤标本经原代培养获取GSCs，免疫组化法检测其肿瘤干细胞及干细胞标记物Nestin的表达；鉴定后的GSCs经低氧诱导，免疫荧光法检测其诱导分化后内皮细胞标记物CD31、CD144和胶质瘤细胞标记物GFAP的表达，RT—PCR和Western—blot法检测其CD31的表达；建立胶质瘤干细胞皮下荷瘤裸鼠模型，免疫组化技术检测模型中人来源的CD31的表达。结果（1）悬浮生长的胶质瘤干细胞球样细胞经免疫组化鉴定Nestin表达阳性；（2）低氧诱导后的GSCs能够表达CD31、CD144，有些细胞能够同时表达CD144和GFAP；（3）RT—PCR检测发现GSCs在诱导前后都有CD31mRNA的表达，而Western—blot检测到只有诱导后的GSCs有CD31蛋白的表达；（4）胶质瘤干细胞荷瘤裸鼠模型的肿瘤组织中部分微血管抗人CD31抗体染色阳性。结论胶质瘤干细胞不仅在体外低氧条件下可分化为内皮细胞，在体内微环境条件下同样可分化为血管内皮细胞，并参与胶质瘤新生组织的血液供应。
- 聂秀涛金贵善米蕊芳张国滨谢坚曹泽周益强董程远刘福生
- 关键词：胶质瘤干细胞内皮细胞低氧诱导
- 培养科研型硕士研究生的科研思维被引量：8
- 2012年
- 医学科研需要一种科学的思维模式,通过对相关文献的查阅,对科研过程的整体过程的把握,对科研逻辑性的重视,对医学标书的学习和书写及对科研创新的鼓励,在实践中培养和提高科研型硕士研究生的科研思维能力。
- 金贵善刘福生
- 关键词：科研思维
- 指导临床医学科研型硕士研究生发表SCI论文被引量：3
- 2012年
- SCI论文发表的数量和质量成为研究生综合素质及能力的重要体现。我们从提高阅读文献能力、指导学生设计实验、学习实验技术、如何进行写作、如何投稿五方面来指导科研型硕士研究生SCI论文的发表。
- 刘福生金贵善
- 关键词：SCI论文
- 神经胶质瘤干细胞向内皮细胞分化的差异基因表达谱的分析被引量：2
- 2015年
- 目的 检测并分析胶质瘤干细胞（GSCs）低氧诱导分化为内皮细胞过程的差异基因表达谱的关键通路和基因,为恶性胶质瘤的治疗寻找新的靶基因.方法 从U87胶质瘤细胞株中提取GSCs细胞并进行免疫荧光鉴定;将GSCs在水凝胶上低氧诱导分化,并对分化后的内皮细胞进行免疫荧光鉴定;收集并提取细胞总RNA,用基因芯片检测分化前、后的细胞差异表达基因,进而分析差异基因的显著靶向性功能和差异基因参与的信号转导通路,从而筛选出关键调控信号通路和基因.结果 提取的GSCs表达CD133、Nestin、SOX2等干细胞标志物;低氧诱导5d后细胞表达CD31、CD34两种内皮细胞标志物;差异基因表达谱存在481个上调基因及245个下调基因（差异倍数＞2）,筛选出转化生长因子β（TGF-β）信号通路、脂肪酸合酶（FASN）、脯氨酰-4-羟化酶亚基α1（P4HA1）等多个有意义的通路和基因（均P ＜0.01）.结论 U87细胞中提取的GSCs可经体外低氧诱导分化为内皮细胞,TGF-β信号通路、FASN及P4HA1可能成为胶质母细胞瘤具有前景的治疗靶点.
- 张晋金贵善米蕊芳周益强房绍伟朱树干刘福生
- 关键词：神经胶质瘤干细胞研究内皮细胞细胞低氧基因芯片
- 血小板源性生长因子B及其基因启动子区甲基化在脑胶质瘤中的表达及意义被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨脑胶质瘤中血小板源性生长因子B（PDGF-B）表达水平及其基因启动子区甲基化程度与肿瘤增殖的关系。方法运用免疫组化检测54例脑胶质瘤中PDGF-B、磷酸化Smad2（P-Smad2）和Ki-67的表达水平；运用焦磷酸测序检测上述54例脑胶质瘤中PDGF-B启动子区甲基化程度。结果（1）PDGF-B表达水平随着病理分级的增高而增多（P〈0．05）；（2）PDGF-B表达分别与Ki-67、P-Smad2表达呈正相关（r=0．839，P〈0．001）（r=0．802，P〈0．001），与PDGF-B甲基化水平呈负相关（r=-0．817，P〈0．001）；（3）在低级别和高级别胶质瘤中，PDGF-B甲基化水平的差异具有统计学意义（P=0．001）。结论PDGF-B甲基化水平越低，其蛋白表达越高，则胶质瘤恶性程度及增殖活性越高。
- 周益强金贵善米蕊芳董程远张晋刘福生
- 关键词：神经胶质瘤基因甲基化焦磷酸测序血小板源性生长因子B
- 脑胶质瘤干细胞和血管关系的研究进展被引量：5
- 2014年
- 胶质瘤是成人颅脑肿瘤中最常见、侵袭性最强的肿瘤，来源于星形细胞或少枝胶质细胞，研究显示该病的发病率逐渐增高^[1]。随着胶质瘤的治疗技术不断改进，瘤内血管成为胶质瘤治疗的重要靶点，但是胶质瘤的预后特别是胶质母细胞瘤仍然不太理想。近来大量研究显示，在胶质瘤的发生、转移和复发过程中胶质瘤干细胞起到了关键性的作用，
- 聂秀涛金贵善徐厚池刘福生
- 关键词：胶质瘤干细胞颅脑肿瘤胶质母细胞瘤星形细胞
