张璐
- 作品数：11 被引量：35H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省青年杰出人才基金湖北省卫生厅科研基金更多>>
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- 脑源性神经营养因子基因沉默对RPMI8226细胞表达VEGF的影响
- 2015年
- 目的 研究脑源性神经营养因子（BDNF）对多发性骨髓瘤（MM）细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）的调控作用,初步探讨BDNF与MM血管新生的关系.方法 设计和构建针对人BDNF基因的siRNA表达载体,用脂质体Lipofectamine^TM2000介导转染,将空载体质粒pGenesil-1和重组质粒pGenesil-shRNA-BDNF分别转染MM细胞株RPMI8226细胞（分别命名为P0组、P1组）.采用RT-PCR法和Western-blot法鉴定干扰后BDNF的表达;MTT法和流式细胞术检测细胞的增殖、凋亡;RT-PCR法和ELISA法检测干扰BDNF对细胞表达VEGF的影响.结果 ①成功构建了针对BDNF的siRNA真核表达载体.与未转染组（Pn组）及P0组相比,P1组BDNF mRNA水平及蛋白水平显著下调（P值均＜0.05）;②P1组细胞的增殖活性（0.42±0.06）显著低于Pn组（0.56±0.06）和P0组（0.50±0.04）（P值均＜0.05）;③P1组细胞的早期凋亡率[（53.84±9.95）％]明显高于Pn组[（5.23±2.46）％]和P0组[（9.10±3.46）％] （P值均＜0.01）;④P1组细胞VEGF121、VEGF145和VEGF165mRNA表达水平分别为Pn组的（0.62±0.07）、（0.47±0.09）和（0.57±0.02）倍（P值均＜0.05）.⑤P1组细胞VEGF的分泌水平分别为Pn组的（0.36±0.05）倍和P0组的（0.44±0.06）倍（P值均＜0.05）.结论 BDNF基因沉默可促进RPMI8226细胞凋亡并抑制其增殖,下调RPMI8226细胞VEGF的表达,BDNF可能通过调控MM细胞VEGF的表达而参与MM血管新生的病理过程.
- 黄靖褚章波陈蕾王雅丹张璐胡豫孙春艳
- 关键词：RNA干扰脑源性神经营养因子血管内皮生长因子A
- 脑源性神经营养因子激活其受体TrkB在多发性骨髓瘤发病机制中的作用被引量：5
- 2008年
- 目的研究异常表达的脑源性神经营养因子（BDNF）在多发性骨髓瘤（MM）发生、发展中的作用及其信号通路。方法采用锥虫蓝拒染法检测BDNF对人MM细胞系RPMI8226、U266和KM3细胞存活的促进作用，MTT比色法观察BDNF对苯丙氨酸氮芥和长春新碱细胞毒作用的影响，Western blot检测BDNF对MM细胞TrkB磷酸化的影响。通过动物模型观察BDNF对肿瘤生长和实验动物存活时间的影响。结果BDNF以浓度依赖性方式促进MM细胞的存活，50μg／LBDNF作用后存活细胞数较对照组明显增加。BDNF可明显降低苯丙氨酸氮芥和长春新碱的细胞毒性，50μg／LBDNF作用后，苯丙氨酸氮芥和长春新碱的EC50值分别为无BDNF作用时的2倍和3倍。体内实验表明BDNF可明显促进异种移植的MM裸鼠模型中肿瘤的生长，经BDNF处理和未经BDNF处理组肿块的平均体积分别为3240．9mm^3和1032．7mm^3（P〈0．05），生存时间分别为13d和21d（P〈0.05）。MM细胞中异常表达的TrkB是BDNF的功能性受体，外源性BDNF作用后，MM细胞TrkB磷酸化水平明显增加，并且Trk抑制剂K252a可明显抑制BDNF诱导的MM细胞迁移。结论外源性BDNF可磷酸化激活MM细胞表面TrkB受体，促进骨髓瘤细胞的增殖、存活、迁移并参与骨髓瘤细胞的化疗耐药，在MM的病理生理进程中起重要作用。
- 孙春艳胡豫郭涛黄靖张璐褚章波
- 关键词：多发性骨髓瘤脑源性神经营养因子受体蛋白质酪氨酸激酶类磷酸化
- 核因子-κB途径介导脑源性神经营养因子促进多发性骨髓瘤细胞分泌基质金属蛋白酶-9
- 2008年
- 目的探讨脑源性神经营养因子（BDNF）通过核转录因子（NF）-κB诱导多发性骨髓瘤（MM）细胞基质金属蛋白酶（MMP）-9分泌的具体机制。方法培养人MM细胞株RPMI8226，使用明胶酶谱法检测RPMI8226细胞分泌的活性MMP-2、MMP-9水平的变化，用化学发光凝胶电泳迁移率分析（EMSA）法检测RPMI8226细胞中NF-κB的活性。结果以25、50、100和200μg／L浓度的BDNF刺激RPMI8226细胞24h后，其活性MMP-9的分泌水平分别为2．03±0．48、2.99±0．46、4.63±0．62和5．62±1．29μg／L，均明显高于对照组（P〈0.01），而MMP-2的表达在各浓度组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。当BDNF作用浓度为100μg／L时，预先分别用1 mmol/L的NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸脂（PDTC）和500 nmol/L的BDNF高亲和力受体TrkB的酪氨酸抑制剂K252α处理15min和1h后，K252α和PDTC（P〈0．001）均能显著抑制RPMI8226细胞MMP-9的分泌（光密度值分别为867．52±101．81、727．98±92．05，对照组为1159．01±233.15，与对照组比，P值均〈0．01）。随着BDNF浓度的升高，NF-κB的活化作用明显增强，于100μg／LBDNF加K252a预处理1h后，6、12、24h的3个时间点K252a均能明显抑制BDNF对NF-κB的激活作用（P〈0．05），且随BDNF作用时间的延长而增强。结论BDNF促进MM细胞血管新生的能力可能是通过NF-κB信号转导途径激活MMP-9而实现的。
- 张璐胡豫孙春艳黄靖诸章波
- 关键词：脑源性神经营养因子血管生成因子核因子ΚB基质金属蛋白酶9骨髓瘤
- 脑源性神经营养因子对RPMI8226细胞表达和分泌血管内皮生长因子的调控作用被引量：1
- 2008年
- 脑源性神经营养因子（BDNF）是神经营养因子超家族成员之一，多项研究证实BDNF及其功能性受体TrkB高表达于多种恶性肿瘤，包括人类多发性骨髓瘤（MM）^[1]。既往研究发现，MM患者血浆中BDNF水平明显增高，而且与血管内皮生长因子（VEGF）表达水平存在相关性^[2]，本实验中我们检测了外源性BDNF对人类MM细胞株RPMI8226细胞中VEGF表达和分泌水平的影响，BDNF／TrkB信号通路在此过程中的作用，为BDNF通过诱导VEGF表达而参与MM血管新生病理过程提供依据。
- 黄靖胡豫孙春艳郭涛王雅丹洪柳张璐褚章波
- 关键词：脑源性神经营养因子分泌血管内皮生长因子细胞表达RPMI8226细胞VEGF表达
- 抗脑源性神经营养因子单克隆抗体在骨髓瘤异体移植动物模型中的抗肿瘤效应(英文)被引量：1
- 2008年
- 为探索BDNF/TrkB途径是否可能成为治疗MM的潜在靶点、抗脑源性神经营养因子(BDNF)单克隆抗体能否阻碍疾病的发展,用骨髓瘤异体移植的动物模型评估在体内BDNF单克隆抗体的抗肿瘤活性。选择糖尿病抵抗/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠,皮下注射人骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞建立异体移植动物模型。抗体以20μg/只的剂量于接种肿瘤细胞后第1、2、3天腹腔内注射或者以100μg/只的剂量于检测到瘤体后每周1次腹腔内注射。采用组织学方法检测瘤细胞的形态特征,以免疫组织化学染色法分析瘤组织的微血管密度,应用3H-TdR掺入法和Matrigel网状结构形成实验分别检测BDNF单克隆抗体对RPMI8226细胞体外增殖和PRMI8226细胞诱导的内皮细胞血管新生的影响。结果表明:在建立的骨髓瘤细胞异体移植动物模型内,多次注射BDNF单克隆抗体可缩小肿瘤体积,降低瘤组织微血管密度,延长无病生存期和生存时间,而且BDNF单克隆抗体可显著抑制体外RPMI8226细胞的增殖和诱导内皮细胞血管新生,而相应的对照抗体却无此效应。结论:BDNF单克隆抗体可抑制动物模型中皮下浆细胞瘤的生长和血管新生。
- 王雅丹胡豫黄靖张璐孙春艳
- 关键词：脑源性神经营养因子骨髓瘤
- 脑源性神经营养因子单克隆抗体在NOD/SCID小鼠骨髓瘤模型体内的抗瘤活性被引量：2
- 2007年
- 目的以多发性骨髓瘤(MM)细胞株 RPMI 8226异体移植小鼠为动物模型,评估抗脑源性神经营养因子(BDNF)单克隆抗体(单抗)存体内的抗肿瘤活性。方法选择糖尿病抵抗/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠,皮下注射 RPMI 8226细胞建立骨髓瘤细胞异体移植动物模型。以20μg/只的 BDNF 单抗剂量于接种肿瘤细胞后第1、2、3天腹腔内注射或者以100 μg/只的剂量于检测到瘤体后每周1次腹腔内注射。采用组织学方法检测瘤细胞的形态特征,免疫化学染色法分析瘤组织的微血管密度(MVD)。用~3H-TdR 掺入法和 Matrigel 网状结构形成实验分别检测 BDNF 单抗对 RPMI8226细胞体外增殖和 PRMI 8226细胞诱导的内皮细胞血管新生的影响。结果在 NOD/SCID 小鼠体内建立的骨髓瘤细胞异体移植动物模型,其皮下种植的成瘤率高,具有多种与浆细胞瘤相似的病理学特征。未治疗组小鼠皮下注射 RPMI 8226细胞后(20±2)d 可检测到皮下肿瘤;接种肿瘤细胞后连续3 d 注射20 μg BDNF 单抗的治疗组,小鼠平均无肿瘤生存期延长为(30±6)d,而相应埘照抗体治疗组无肿瘤生存期为(22±3)d,与末治疗组相比差异无统计学意义;同时,其中位存活时间为(57±7)d,与相应的对照抗体治疗组[(48±4)d]相比明显延长(P<0.05);治疗组小鼠自然死亡时肿瘤体积为(157.9±21.6)mm^3,较对照抗体组[(405.5±35.2)mm^3]明显缩小(P<0.05)。对于接种肿瘤细胞后第27天起每周注射1次 BDNF 单抗(100 μg/次)的治疗组,肿瘤的生长亦受到部分抑制,相应对照抗体组与未治疗组相比肿瘤生长差异无统计学意义;同时在 BDNF 单抗治疗组瘤体的组织切片中,观察到部分瘤细胞出现凋亡的形态学表现,坏死区被纤维结缔组织浸润。未治疗组瘤块的 MVD 为38个/0.216 mm^2,BDNF 单抗治疗组(100 μg/次)MVD 为11个/0.216 mm^2,与未治疗组相比对照抗体治疗组瘤块的 MVD 没有明显下降(35个/0.216 mm^2)(P>0.05)。在�
- 王雅丹胡豫张璐黄靖孙春艳
- 关键词：脑源性神经营养因子血管新生单克隆
- 脑源性神经营养因子单克隆抗体在NOD/SCID小鼠骨髓瘤模型体内的抗瘤活性
- 王雅丹胡豫张璐黄靖孙春艳
- 脑源性神经营养因子通过AKT和ERK1/2信号通路诱导内皮细胞血管生成(英文)被引量：12
- 2008年
- 本研究探讨脑源性神经营养因子(BDNF)促进血管新生的作用及其参与的信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据。以人脐静脉内皮细胞为对象,采用Western blot方法检测细胞内磷酸化Akt、ERK1/2蛋白质的表达;采用Transwell小室迁移实验和管腔形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力,MTT法检测内皮细胞增殖活性,FITC-Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术分析细胞调亡。结果表明:BDNF以时间依赖性的方式激活PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路。应用PI3K激酶抑制剂Ly294002、MEK1激酶抑制剂PD98059可以明显阻断BDNF对PI3K/Akt、MEK1/ERK信号通路的激活。100ng/ml的BDNF体外促内皮细胞血管新生能力与25ng/ml血管内皮生长因子(VEGF)相当,其中BDNF诱导的细胞迁移分别被Ly294002和PD98059阻断,其抑制率分别约为74%和36%;同样,Ly294002、PD98059可部分阻断BDNF诱导的小管形成效应,其阻断率分别约57%和37%;而BDNF的促增殖效应仅被PD98059拮抗,抑制凋亡效应仅受Ly294002影响。结论:BDNF在体外有促血管新生的作用。PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路以不同机制共同调节这一过程,其中PI3K/Akt信号通路起着更为重要的调节作用。
- 王雅丹胡豫张璐孙春艳
- 关键词：脑源性神经营养因子血管新生信号通路
- 乳腺癌患者凝血功能的改变及意义被引量：10
- 2007年
- 目的研究乳腺良性肿瘤和乳腺癌患者的常规止凝血功能指标及分子标志物的变化,了解乳腺癌患者凝血功能改变的意义。方法将498例乳腺癌病人按病理分期分为Ⅰ-Ⅱ期组(177例)、Ⅲ-Ⅳ期组(312)例,检测不同分期的乳腺癌患者和132例乳腺良性肿瘤患者的常规凝血功能指标[凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(aPTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fbg)、血小板(PLT)]和分子标志物D-dimer。结果乳腺癌患者的D-dimer、Fbg、PLT水平和乳腺良性肿瘤相比明显增加(P<0.01)且PT时间缩短;而aPTT、TT水平与良性肿瘤组相比无显著性差异(P>0.05)。肿瘤的恶性程度分期为Ⅰ-Ⅱ期患者血浆D-dimer、Fbg、PLT水平均高于Ⅲ-Ⅳ期的患者(P<0.05),而PT、aPTT、TT在两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论乳腺癌患者尤其是晚期患者常伴随凝血功能异常,监测患者体内PT、Fbg、D-dimer、PLT的改变可作为预防血栓形成及慢性DIC等凝血性疾病的有效措施,并指导临床抗凝药物的使用。
- 张璐胡豫孙春艳黄靖
- 关键词：凝血功能D-二聚体
- 表达脑源性神经营养因子的人多发性骨髓瘤小鼠模型的建立被引量：4
- 2007年
- 过去的研究证实脑源性神经营养因子(BDNF)在体外具有促进多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖并诱导MM血管新生的能力。本研究探讨BDNF/TrkB途径是否为治疗MM的潜在靶点,并比较两种途径建立人MMNOD/SCID小鼠模型的优缺点,为深入探索治疗MM的新靶点奠定基础。选择糖尿病抵抗/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠,通过皮下注射或尾静脉注射人骨髓瘤细胞株RPMI8226建立两种异体移植动物模型。观察荷瘤后小鼠的生长状态,测量皮下瘤块的体积;荷瘤后3周,每周经眼眶后静脉丛采血,检测血清中人源λ轻链含量、Ca2+浓度和血浆中人源BDNF浓度,并计数红细胞;小鼠死后,采用组织学方法观察瘤细胞的形态特征,流式细胞术检测小鼠外周血和骨髓中人源性CD38+细胞比例,采用计算机X线数字摄影观察小鼠全身骨密度的改变和骨质破坏情况。结果表明:皮下注射模型的成瘤率高(5/5),具有多种与浆细胞瘤相似的病理学特征,但其骨髓中未检测到MM细胞,血清中钙离子浓度不高,M蛋白浓度升高不明显且未发现溶骨性损害的组织学和影像学证据。尾静脉注射模型成瘤率相对较低(4/7),骨髓中可检测到呈浸润生长的人CD38+细胞;而且在荷瘤3周后,血清中即可检测到人源M蛋白;随着肿瘤的生长,M蛋白水平、钙离子浓度逐渐升高,并有溶骨性损害的影像学证据。两种模型血浆中人源BDNF的水平亦逐渐升高,9周时浓度分别为(73±11)pg/ml和(105±18)pg/ml。结论:本研究成功建立了两种高表达BDNF的MM荷瘤NOD/SCID小鼠模型,两种模型相互结合应用,为探索MM治疗的新靶点BDNF/TrkB提供了合适的动物模型。
- 王雅丹胡豫张璐黄靖孙春艳
- 关键词：多发性骨髓瘤动物模型脑源性神经营养因子
