唐亮
- 作品数：78 被引量：207H指数：8
- 供职机构：同济大学附属上海市肺科医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目上海市科委重大科技攻关项目上海市卫生局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 异种VEGF融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌的抑制作用被引量：2
- 2008年
- 目的:利用原核表达系统,构建异源血管内皮生长因子融合蛋白疫苗,研究该融合蛋白疫苗对小鼠Lewis肺癌肿瘤模型的抗血管生成主动免疫治疗效果。方法:将鸡VEGF基因克隆入pGEX-4T-2原核表达载体,经IPTG诱导融合蛋白表达,Ni-NTA纯化,透析复性,构建GST-cVEGF融合蛋白疫苗。将C57BL16J小鼠随机分为3组,GST-cVEGF疫苗组10只、cVEGF疫苗组10只、生理盐水组(NS)10只。将各组样品与等体积弗氏佐剂混合,各组小鼠每只分别0、2、3周免疫100μgGST-cVEGF融合蛋白疫苗、单纯cVEGF蛋白疫苗、生理盐水。接种Lewis肺癌细胞,观察肿瘤的生长情况和小鼠状态。接种肿瘤18d后,处死小鼠,剥离肿瘤称重。检测小鼠血清中特异性抗VEGF抗体滴度。结果:GST-cVEGF疫苗组、cVEGF组、生理盐水组肿瘤均重分别为(1·55±0·534)g、(1·93±0·607)g、(2·87±0·642)g。GST-cVEGF疫苗组肿瘤重量明显小于生理盐水组(P<0·01)。疫苗组血清产生抗VEGF抗体滴度为1∶2000。结论:异种血管内皮生长因子基因重组融合蛋白疫苗可干扰机体对自身VEGF的免疫耐受,可产生较高水平的特异性抗VEGF抗体,并具有抑制小鼠Lewis肿瘤生长的效应。
- 刘倩唐亮李英辉周彩存谈立松赵玉军张培德张尚权
- 关键词：血管内皮生长因子融合蛋白疫苗小鼠
- 博莱霉素诱导人肺泡上皮细胞过程中核转录因子-κB对核因子2相关因子2信号通路的调控机制被引量：1
- 2014年
- 目的 观察人肺泡上皮细胞HPAEpiC中核转录因子-κB （NF-κB）基因沉默前后核因子2相关因子2（Nrf2）及其相关表达产物含量的变化,探讨博莱霉素诱导的过程中NF-κB对Nrf2信号通路的调控机制.方法 应用慢病毒技术沉默人肺泡上皮细胞HPAEpiC中的NF-κB基因,采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术检测博莱霉素诱导前后HPAEpiC细胞中的Nrf2、胞浆蛋白伴侣分子（Keap1）、Cullin3蛋白（Cul3）、Rbx1、蛋白激酶C（PKC）、磷酸肌醇3激酶（PI3K）、细胞外信号调节激酶（ERK）、NF-κB、κB抑制蛋白（IκB）的mRNA相对表达量,采用流式细胞术膜联蛋白V（Annexin V）-红色荧光蛋白（RFP）单染法检测各实验组的细胞凋亡率,采用Western blot检测NF-κB、Nrf2及其相关蛋白的表达量.结果 慢病毒感染HPAEpiC细胞后NF-κB基因表达下降90.6％,博莱霉素诱导后NF-κB沉默的人肺泡上皮细胞中Nrf2基因表达量上升142.6％,并与NF-κB、κB抑制蛋白（IκB）、Keap1、Cul3、Rbx1表达呈负相关,PI3K表达增加11.6倍而PKC、ERK无明显变化,其凋亡率与对照组比较增高.结论 在博莱霉素诱导的过程中,HPAEpiC细胞的NF-κB表达量增加可以抑制Nrf2的功能.在NF-κB被沉默的情况下,Nrf2通过PI3K途径并同时降低Keap1-Cu13-RBx1复合物表达实现活化,可能通过启动其下游的抗氧化反应,减少博莱霉素导致的氧自由基对细胞的损伤.
- 赵印敏汤中文郑卉粟波唐亮陈昶
- 关键词：核转录因子-ΚB
- COX-2反义核酸对H1299细胞增殖及顺铂敏感性的影响
- 2005年
- 背景与目的目前已知环氧化酶2(COX2)在非小细胞肺癌(NSCLC)的浸润、发展及转移中有重要意义,抑制COX2的表达可能抑制NSCLC的发生及发展。用反义COX2重组载体转染高表达COX2的人非小细胞肺癌细胞株H1299,观察其对H1299细胞的生长抑制作用及顺铂敏感性的影响。方法通过脂质体介导将COX2反义核酸质粒转入H1299细胞,经氨基糖苷磷酸转移酶(Geneticin,G418)筛选获得稳定表达COX2反义核酸的NSCLC转染细胞系;采用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)技术检测COX2mRNA的表达水平;应用蛋白质印迹分析(WesternBlot)技术检测COX2蛋白表达水平的变化;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测COX2反义核酸对H1299细胞增生的影响及其对H1299细胞的顺铂敏感性的影响。结果反义COX2基因转染后的H1299细胞中COX2mRNA表达水平明显下调,COX2蛋白表达水平明显减低。转染后的H1299细胞的生长速率明显下降(P<0.05),对顺铂的半数存活浓度(IC50)值由转染前的3.8mg/l降低为1.8mg/l(P<0.05)。结论COX2反义核酸导入不仅可抑制H1299细胞的增生,而且可增加H1299细胞对顺铂的敏感性。
- 高志强唐亮粟波赵印敏周彩存
- 关键词：环氧化酶-2H1299逆转录聚合酶链式反应反义核酸
- 靶向血管新生肽修饰的氧化铁纳米粒对荷瘤裸鼠磁热疗的研究被引量：12
- 2010年
- 目的:制备一种具有靶向新生血管特点的葡聚糖包覆超顺磁性氧化铁纳米粒(superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs),观察其与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的亲和力以及对肿瘤组织的靶向结合能力,观察在外加交变电场条件下对荷瘤裸鼠进行肿瘤局部磁热疗的效果。方法:采用化学共沉淀法制备葡聚糖包覆的SPIONs,并将其共价偶联靶向血管新生肽RGD10,命名为RGD-SPIONs。电子显微镜下观察RGD-SPIONs的形态,纳米粒度分析仪检测其大小,原子吸收分光光度计法检测铁含量,与细胞和组织结合后利用普鲁士蓝法进行铁染色鉴定。在外加交变电场的条件下,观察RGD-SPIONs对HUVECs的热杀伤作用,以及静脉注射后对荷瘤裸鼠进行肿瘤局部磁热疗的效果。结果:RGD-SPIONs形态近似圆形,直径为30～40 nm,核心铁颗粒直径为8～10 nm,铁含量为(1.71±0.16)g/L。SPIONs利用RGD肽与整合素的亲和力结合在HUVECs表面,其结合率为(54.4±8.2)%,用交变电场处理后,显示有(38.4±9.8)%HUVECs发生凋亡。小鼠肿瘤冰冻组织切片观察发现,RGD-SPIONs与肿瘤组织有较好的亲和力。局部热疗后荷瘤小鼠的抑瘤率为54.8%,与对照比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RGD-SPIONs在大小和性能上符合热疗要求,与HUVECs有较好的亲和力,具有肿瘤组织靶向结合能力,局部热疗后对肿瘤生长具有一定的抑制作用。
- 赵印敏粟波杨晓君唐亮周彩存
- 关键词：异种移植模型抗肿瘤试验透热疗法铁化合物
- T7噬菌体表达巨细胞病毒PP65蛋白抗原的初步研究
- 2006年
- 目的利用噬菌体展示技术构建巨细胞病毒基质蛋白PP65的抗原,初步评价其抗原性。方法PP65的基因片段经酶切后,与T7噬菌体的基因组相应酶切位点结合,借助包装蛋白组装成为完整的噬菌体。PP65目的蛋白以融合蛋白的形式表达在T7噬菌体的头蛋白部位,每个噬菌体颗粒表面可表达5～15个拷贝。噬菌体可以在宿主细胞中快速繁殖,并且能够迅速裂解宿主细胞,使目的蛋白的富集达到很高的效率。人巨细胞病毒基质蛋白PP65可以激发机体强烈的免疫反应,运用T7噬菌体载体展示系统表达PP65的部分肽段,扩增噬菌体,以SDS-PAGE电泳和western-blot鉴定所表达的抗原特性。结果获得了重组T7-PP65噬菌体,通过鉴定,噬菌体表达在其头蛋白上的PP65抗原可以被天然PP65的单克隆抗体所识别。结论噬菌体展示技术可以有效地进行病毒蛋白抗原的表达,为抗原筛选和疫苗的研制提供科学依据。将PP65表达在T7噬菌体表面,可以研究其免疫原性及评估其作为疫苗的可能性。
- 谈意隽周彩存唐亮刘岽曾宪卓孙宏彬张钥季育华
- 关键词：噬菌体展示巨细胞病毒PP65抗原表位
- 三氯化铟对人正常肺上皮细胞增殖的影响及其机制研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨不同浓度三氯化铟（InCl3）对人正常肺上皮（Beas-2B）细胞增殖的影响及其可能机制。方法不同浓度（0、0．3、1．0、3．0、10．0、30．0、90．0、270．0、810．0μmol／L）InCl3分别处理Beas-2B细胞24、48和72h，用CCK-8法检测InCl3对细胞增殖的影响；用Annexin V-PI双染，经流式细胞术检测InCl3对细胞凋亡的影响；以2’，7’-二氯荧光黄双乙酸盐为探针，用流式细胞术检测InCl3染毒后Beas-2B细胞内的活性氧（ROS）水平。结果0．3～3．0μmol／LInCl3组的细胞存活率明显升高，而30．0～810．0μmol／LInCl3组72h后细胞存活率降低，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；0．3μmol／LInCl3组在72h内都未能引起细胞凋亡的发生，而30．0和810．0μmol／LInCl3组72h后引起明显的细胞早期凋亡，0.3μmol/LInCl3组72h内ROS含量与对照组相比略微下降，而30．0和810．0μmol/LInCl3组72h后，细胞内ROS含量明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论低浓度InCl3可能通过降低细胞内ROS促进细胞增殖，而高浓度InCl3则通过引起细胞内ROS升高、细胞凋亡而发挥其抑制细胞活力的作用。
- 刘佳赵印敏唐亮俞平孙道远
- 关键词：铟BEAS-2B细胞凋亡活性氧
- 非小细胞肺癌环氧合酶-2表达与血管生成之间的关系被引量：1
- 2006年
- 背景与目的:我们以前的研究发现,环氧合酶-2(COX-2)在非小细胞肺癌(NSCLC)上调表达是患者独立预后的不良因素。COX-2参加结肠癌等实体瘤的血管生成,是否参与NSCLC血管生成目前尚有争议。本研究的目的是探讨COX-2表达与血管生成和血管内皮细胞生长因子(VEGF)-A表达之间的关系。方法:用脂质体将表达COX-2反义核酸的质粒和空质粒分别稳定转染H1299细胞(H1299-AS和H1299-P),采用RT-PCT和W esternB lot法检测细胞株COX-2和VEGF-A的水平。应用免疫组织化学染色法检测60例NSCLC肿瘤组织COX-2、VEGF-A和CD31表达情况,用χ2检验分析这些参数间相互关系。结果:H1299-AS细胞株COX-2 mRNA和蛋白水平较H1299-P细胞明显下降;VEGF-A蛋白表达水平亦同步下降。肺腺癌COX-2表达率为77%,显著高于肺鳞癌的37%(P<0.05)。NSCLC中COX-2和VEGF-A表达与肿瘤微血管密度明显相关(r分别为0.55和0.42,P<0.05)。COX-2表达阴性患者肿瘤微血管密度为45.7±15.6根/200×视野,显著高于不表达患者的37.4±9.7根/200×视野(P<0.05)。NSCLC组织中COX-2表达水平和微血管密度与患者术后生存期明显相关(P<0.05)。结论:NSCLC存在COX-2和VEGF-A共表达,COX-2可能通过诱导VEGF-A表达来发挥促血管生成样作用。
- 周彩存周崧雯倪健易祥华唐亮粟波
- 关键词：非小细胞肺癌环氧合酶-2血管内皮细胞生长因子血管生成
- 表皮生长因子受体靶向重组T7噬菌体抗肿瘤疫苗的免疫活性被引量：1
- 2005年
- 目的探讨表皮因子受体为靶向,重组T7噬菌体疫苗在体诱导的免疫活性。方法用构建的重组T7噬菌体疫苗免疫动物,Dot-Blot和流式细胞仪检测产生的特异性抗体,MTT法检测产生的特异性杀伤肿瘤细胞活性。结果实验组动物均产生特异性抗体,与A431细胞结合的阳性细胞率分别为37.6%、47.6%和35.1%;T7415-1b-90和T7415-1b-132实验组均诱导产生对A431细胞的特异性杀伤作用,检测的ODE+T与对照组相比具有显著性差异(P<0.01);T710-3b-638实验组对肿瘤细胞无杀伤作用。结论异源EGFR分子构建的重组T7噬菌体疫苗可以诱导机体产生体液免疫反应和细胞免疫反应。
- 蔡新华张钦宪唐亮刘岽谈立松
- 关键词：表皮生长因子受体抗肿瘤疫苗抗体
- VGFR噬菌体疫苗的构建及抗肿瘤效果被引量：3
- 2006年
- 目的构建重组血管内皮生长因子受体(VGFR)／中心实验激酶功能区受体(KDR)噬菌体疫苗并且观察其抗肿瘤效果。方法将人源VGFR、KDR的膜外部分插入到T7噬菌体的基因组中,作为一种融合蛋白展示在T7噬菌体外壳上,从而构建了一种新型的抗肿瘤疫苗。ELlSA方法检测抗VGFR、KDR 抗体,C57小鼠经过四次免疫,接种Lewis肺癌后记录肿瘤生长情况,评价疫苗效果。结果成功从人 A549细胞中可克隆出VGFR、KDR基因,并且构建了相应的噬菌体疫苗。ELISA方法检测到了免疫小鼠血清中有特异性抗体的产生,滴度可达104,肿瘤生长曲线显示噬菌体疫苗有明显的抑制肿瘤生长的作用。结论提示利用噬菌体展示技术构建的噬菌体疫苗的应用是一种非常有效的抗肿瘤方法。
- 刘岽唐亮周彩存谈立松
- 关键词：免疫治疗噬菌体KDR疫苗
- VEGF DNA疫苗注射部位对小鼠抗原表达与Th细胞活性的影响
- 2008年
- 目的探讨小鼠不同部位皮下注射VEGF DNA疫苗对抗原表达与Th细胞活性的影响,为DNA疫苗在体内获得良好的细胞免疫提供优化条件。方法用RT-PCR法从A459细胞株中扩增570 bp的VEGF片段,此片段构建成真核表达重组质粒pVAX1-VEGF;在小鼠耳廓、胸部、腹部及背部皮下注射1μg/μl的pVAX1-VEGF DNA100μl,ELISA法检测血清中VEGF抗原表达水平和脾细胞产生的IL-4及IFN-γ动态变化。结果小鼠耳廓、胸部及腹部免疫,VEGF抗原表达较强,其中耳廓免疫所激活的Th1细胞最强,产生524.2 pg/ml IFN-γ,与胸部、腹部及背部免疫的效果相比,差异显著;pVAX1-VEGF疫苗组与pVAX1对照组的Th1与Th2细胞活性差异均显著,不同部位的pVAX1-VEGF疫苗组对Th2细胞活性无明显影响。结论本研究所构建人源VEGF的DNA疫苗能在小鼠体内有效表达,且不同部位皮下免疫后均可激活Th细胞,但以Th1细胞效应为主和耳廓皮下接种最佳。
- 王和勇向阳唐亮谈立松周彩存
- 关键词：皮下注射DNA疫苗抗原表达TH细胞小鼠
