孙海刚
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
- 供职机构：中国医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- FANCF-shRNA质粒构建及其对卵巢癌细胞OVCAR3沉默效应的观察被引量：3
- 2011年
- 目的:构建针对人FANCF基因的特异性shRNA真核表达载体,体外观察siRNA对卵巢癌OVCAR3细胞系FANCF基因的沉默效应。方法:采用基因克隆技术,将设计合成的能表达短发夹RNA的寡核苷酸序列插入真核表达质粒载体pSilencerTM4.1-CMV-neo,构建能表达FANCF-shRNA的真核表达载体;转染人卵巢癌OVCAR3细胞,提取总RNA和蛋白,RT-PCR验证mRNA表达的变化,蛋白质印迹法验证蛋白表达的变化。结果:质粒酶切和测序证实成功构建了FANCF-shRNA的真核表达载体。与野生型OVCAR3相比,脂质体法转染卵巢癌OVCAR3细胞后,FANCFmRNA 24、48和72 h的表达水平与阴性控制组比较均下调,抑制率分别为(23.91±6.58)%(、51.23±5.86)%和(47.42±7.52)%;FANCF蛋白在244、8和72 h的表达水平与阴性控制组比较亦下调,抑制率分别为(16.28±5.46)%(、24.42±6.85)%和(36.05±8.26)%。证实FANCF-shRNA具有沉默OVCAR3细胞FANCF基因表达的效应。结论:siRNA-FANCF干扰可引起卵巢癌OVCAR3细胞系FANCF基因沉默,可能为卵巢肿瘤基础和临床研究提供一种有效的方法。
- 郝俊莹孙海刚李娜余涧坤唐宏涛李艳琳于兆进赵琳何苗魏敏杰
- 关键词：FANCF
- FANCF-shRNA表达质粒的构建及MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型的建立
- 2011年
- 目的构建针对人FANCF基因的shRNA表达质粒(FANCF-shRNA),转染FANCF-shRNA使人乳腺癌MCF-7细胞FANCF基因沉默,从而建立MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型。方法实验分两部分:FANCF-shRNA表达质粒的构建:根据相关文献报道,使用Ambion公司的在线设计软件,设计并合成能够编码针对FANCF基因的小发夹RNA(FANCF-shRNA)的DNA模板,将其插入到p SliencerTM 4.1-CMV neo表达质粒中,形成pSliencerTM 4.1-CMV-FANCF-shRNA重组质粒;将该重组质粒转化到E coli感受态细胞JM109中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增;通过PCR及基因测序方法筛选出插入正确的FANCF-shRNA表达质粒;MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型的建立:碱裂解法提取FANCF-shRNA表达质粒,通过脂质体介导将该质粒转染入人乳腺癌MCF-7细胞中,RT-PCR法检测FANCF基因mRNA表达水平,确认FANCF基因沉默。结果含有重组质粒的阳性克隆菌液PCR扩增片段约为250 bp,并且其基因测序结果显示插入片段碱基排列顺序正确,没有突变,说明FANCF-shRNA表达质粒构建成功;与阴性对照组相比,转染FANCF-shRNA质粒后第2天、第3天、第5天和第7天,FANCF基因mRNA表达水平均明显减低,表达抑制率分别为(36.51±6.84)%、(37.03±6.61)%、(53.03±9.33)%和(39.51±10.13)%(P<0.05),说明FANCF基因沉默,MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染成功建立。结论成功构建了FANCF-shRNA表达质粒并建立MCF-7-FANCF-RNAi细胞模型,为研究FANCF基因在乳腺癌发生发展及耐药产生与调控中的作用奠定实验基础。
- 唐宏涛何苗李娜孙海刚余涧坤郝俊莹魏敏杰
- 关键词：人乳腺癌MCF-7细胞RNAI
- ω-3鱼油脂肪乳对辐射损伤小鼠造血系统保护作用的研究被引量：1
- 2015年
- 目的研究ω-3鱼油脂肪乳对电离辐射引起小鼠骨髓损伤的影响,旨在阐明ω-3鱼油脂肪乳对辐射性造血损伤的保护作用。方法采用直线加速器一次性6.0 Gy全身照射ICR小鼠,建立辐射损伤小鼠模型。取各组小鼠外周血用于白细胞(WBC)和血小板(PLT)计数,取骨髓进行瑞氏-吉姆萨染色观察骨髓象改变,流式细胞术检测骨髓细胞凋亡百分率,免疫细胞化学检测骨髓细胞凋亡抑制因子BCL-XL的表达。结果与空白对照组(BC组)相比,生理盐水组(NS组)小鼠外周血WBC和PLT计数均明显减少(P<0.05),骨髓增生降低,早期及晚期凋亡率显著增加(P<0.05),凋亡抑制因子BCL-XL表达降低;与生理盐水组相比,ω-3鱼油脂肪乳(ω-3组)可显著提高小鼠外周血WBC和PLT计数(P<0.05),促进骨髓增生,抑制骨髓细胞凋亡率(P<0.05),增加凋亡抑制因子BCL-XL的表达。结论ω-3鱼油脂肪乳可以促进骨髓造血系统恢复,对辐射导致的造血系统损伤具有良好的保护作用。
- 孙明立逄蕾鞠学鹏孙海刚余涧坤赵海山姚维范魏敏杰
- 关键词：造血系统细胞凋亡Ω-3鱼油脂肪乳
- 复方曲肽注射液对血小板聚集和血栓形成影响的实验研究被引量：10
- 2011年
- 本研究探讨受试药物复方曲肽注射液的体外抗血小板聚集及体内抑制血栓形成的作用。采用血小板凝聚仪测定不同浓度复方曲肽注射液对血小板聚集的抑制率,并确定量效关系。采用动脉短路血栓模型测定复方曲肽注射液的抑制血栓形成作用。结果表明,复方曲肽注射液具有抑制血栓形成作用和剂量依赖性的抗血小板聚集功能。当复方曲肽溶液总氮终浓度为5μg/m l时,血小板聚集抑制率达到(28.61±22.07)%,其最大活性为100μg/m l的阿司匹林溶液抗血小板聚集活性的2.5倍。复方曲肽注射液的血栓形成抑制率为(33.90±17.56)%。结论:复方曲肽注射液具有抗血小板聚集和抑制血栓形成的作用。
- 陈秋晨于兆进孙海刚于涧坤魏敏杰
- 关键词：血小板聚集血栓模型
