张晓鹏
- 作品数：31 被引量：34H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 血小板衍生生长因子BB亚型在毕赤酵母中的表达及纯化
- 2015年
- 目的:用毕赤酵母表达系统表达重组人血小板衍生生长因子BB亚型(PDGF-BB)。方法:采用PT-PCR从人早幼粒白血病细胞系HL-60细胞中获得目的基因,克隆到表达载体p MEX9K中,质粒线性化后转化酵母表达菌株GS115,筛选后的酵母表达菌株经BMGY/BMMY培养基体系诱导表达后,通过疏水作用、离子交换、凝胶过滤纯化获得目的蛋白,采用SDS-PAGE、Western印迹、N端氨基酸序列和MTT增殖活性测定等方法检测目的蛋白性质及生物活性。结果:重组人PDGF-BB为分泌表达,表达量大于100 mg/L;经三步纯化,获得纯度高于95%且具有较高活性(5.0×105IU/mg)的目标蛋白。结论:利用毕赤酵母表达系统表达重组人PDGF-BB,表达产量高,成本低,工艺简单,易于工业化放大,有良好的市场前景。
- 房婷张晓鹏章晟戴萌萌杨秀旭付玲于长明
- 关键词：巴斯德毕赤酵母表达系统
- 前列腺干细胞抗原与热休克蛋白70羧基端结构域的融合表达及纯化
- 2012年
- 目的构建前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)及热休克蛋白70(heat-shock protein,HSP70)羧基端结构域的重组表达质粒,对重组融合蛋白进行诱导、表达及纯化,为肿瘤疫苗的研究奠定基础。方法克隆人HSP70羧基端基因及PSCA基因,构建重组表达载体pET21-PSCA-HSPC,重组融合蛋白经(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导表达,利用单克隆抗体进行Western blot鉴定,最后进行蛋白纯化。结果成功构建了重组表达质粒pET21-PSCA-HSPC;SDS-PAGE结果显示目的蛋白以可溶性形式存在,经镍柱亲和层析、苯基柱疏水及凝胶过滤柱纯化后,重组融合蛋白纯度在95%以上。结论该研究成功实现了PSCA与HSP70羧基端结构域的可溶性表达。
- 董磊张晓鹏易绍琼任军侯利华付玲于长明陈薇
- 关键词：前列腺干细胞抗原热休克蛋白
- 基于活体成像的表达人PSCA抗原的小鼠肿瘤模型的建立被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨并建立可供药物评价或生物学功能研究的表达人PSCA抗原的荧光素酶小鼠肿瘤模型。方法:克隆人PSCA基因及荧光素酶基因luc,构建真核表达质粒pcDNA-PSCA及pcDNA-luc,共转染RM-1细胞株;照度计检测转染细胞的荧光素酶活性,RT-PCR及流式细胞术检测PSCA的表达,筛选出共表达荧光素酶及人PSCA的RM-PSCA/luc细胞株;将RM-PSCA/luc细胞接种C57BL/6小鼠,观察所致肿瘤的生长情况及小鼠存活状况,并对小鼠进行活体成像检测Luc的表达;采用免疫组织化学染色方法检测人PSCA在小鼠肿瘤组织中的表达。结果:筛选到了稳定共表达Luc及人PSCA抗原的RM-PSCA/luc细胞,接种实验小鼠全部成瘤,肿瘤生长迅速,小鼠平均存活38天;转染荧光素酶基因的肿瘤细胞生物特性稳定,活体成像仪检测到转染荧光素酶细胞在小鼠体内活体成像,荧光素酶表达活性的强弱能够反映肿瘤大小;免疫组织化学染色方法检测到小鼠肿瘤组织PSCA的表达。结论:成功构建了可用于活体成像表达人PSCA抗原的小鼠肿瘤模型,为相关肿瘤药物及疫苗的研发奠定基础。
- 董磊张晓鹏易绍琼毛亚丽于婷侯利华付玲于长明陈薇
- 关键词：前列腺干细胞抗原肿瘤模型
- 杀灭芽孢杆菌芽孢的复合制剂
- 本发明公开了一种杀灭芽孢杆菌芽孢的复合制剂。本发明提供的复合制剂，其活性成分是乳酸链球菌素和L-丙氨酸。应用本发明的复合制剂，在常温条件下，在15min内，对芽孢的杀灭率可达99.37％，比常规试剂乳酸链球菌素提高了约5...
- 陈薇李曼侯利华曹晓梅付玲李建民张晓鹏董大勇宋小红
- 文献传递
- 人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及体外亲和筛选被引量：3
- 2013年
- 目的构建人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,筛选抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)的特异性单链抗体(scFv)。方法利用RT-PCR从5名破伤风抗体滴度较高的健康献浆员外周血淋巴细胞中获得全套人破伤风抗体VH和VL基因,经过重叠PCR将VH和VL基因连接获得scFv片段。将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转化大肠TG1感受态菌,获得抗体库。以TeNT-Hc为抗原对抗体库进行3轮筛选,获得特异性人源性抗TeNT-Hc单链抗体。scFv由pET32a(+)表达载体表达,产物包涵体采用HisTrap FF预装柱纯化并透析复性。采用非竞争酶免疫实验法测定scFv亲和常数(affinity constant,KD值)。检测scFv抑制TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的体外中和活性,计算抑制率。结果构建库容量为1×108的人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,经过筛选获得3株特异性较好的人源性抗TeNT-Hc单链抗体。原核表达结果显示,3株scFv均以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的40%～45%。包涵体经洗涤、纯化和复性后,scFv均保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,1 L培养物经纯化后可获得4～6 mg scFv蛋白。亲和力测定结果,27G、22D和S-4-7H-scFv的KD值分别为(1.25×10-7),(2.31×10-7)和(1.97×10-7)mol/L。3株抗体对TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的抑制率分别为64.5%,58.6%和51.5%。结论人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及具有体外中和活性的特异性抗TeNT-Hc单链抗体的获得,为人破伤风基因工程中和抗体的制备奠定了良好基础。
- 王晗于蕊张晓鹏任军谢娜樊红艳张金龙房婷于长明陈薇
- 关键词：破伤风破伤风毒素单链抗体逆转录聚合酶链反应细菌噬菌体
- 一种抗炭疽芽孢杆菌PA抗原的全人源抗体
- 本发明公开了一种抗炭疽芽孢杆菌PA抗原的全人源抗体，所述抗体通过克隆人源的抗炭疽PA抗原抗体的重链和轻链可变区基因，构建线性表达框，并转染于宿主细胞，通过对PA抗原结合活性和中和活性的筛选而获得。本发明公开的抗体对炭疽芽...
- 陈薇于长明迟象阳李建民徐俊杰刘威岑宋小红张军张晓鹏付玲
- 文献传递
- 血小板衍生生长因子B突变体、其制备方法及用途
- 本发明涉及血小板衍生生长因子B衍生物，具体地，本发明涉及血小板衍生生长因子B突变体，编码该突变体的核酸分子，含有该核酸分子的载体和宿主细胞。本发明还涉及所述突变体的制备方法和纯化方法，以及所述突变体用于制备促进细胞分裂、...
- 陈薇张晓鹏于长明付玲戴萌萌张军徐俊杰侯利华李建民
- 增强DNA疫苗免疫效果策略研究进展
- 2007年
- 在近年发展的疫苗策略中,DNA疫苗由于具备独特的优势而成为研究的热点。然而,虽然DNA疫苗的效果已经在多种动物模型中得到了证实,但是在人体临床试验的结果却不尽如人意。近年来,研究人员发展了多种新的方法来提高DNA疫苗的免疫效果。本文就这一领域的进展进行综述,并对DNA疫苗的应用前景做一展望。
- 张晓鹏董磊陈薇
- 关键词：DNA疫苗佐剂
- 中试规模纯化重组鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析
- 2016年
- 重组F1-V融合蛋白(rF1-V)是目前在进行临床研究的鼠疫亚单位疫苗的主要成分。本研究摸索了rF1-V的可溶表达条件,并对条件进行了优化和放大,确定的中试发酵工艺为:在重组菌对数生长期中期加入50μmol/LIPTG,25℃诱导表达5h。通过硫酸铵分级沉淀、离子交换、疏水相互作用层析和凝胶过滤四步纯化,最终得到纯度为99%、回收率大于20%且各项检测指标合格的蛋白。在此基础上,将蛋白使用氢氧化铝佐剂进行吸附,在小鼠体内进行了免疫原性研究。ELISA测定两次皮下免疫后血清的抗体滴度。比较融合蛋白免疫组(rF1-V)与单一抗原免疫组(rF1、rV)以及联合抗原免疫组(rF1+rV)之间体液免疫反应的差异。结果显示:20μgrF1-V免疫剂量组诱导的抗F1抗体滴度明显高于其他组,抗V抗体滴度与其他组相比没有显著差异。表明本工艺制备的rF1-V抗原有望作为鼠疫亚单位疫苗的主要组分。
- 房婷任军张金龙尹可欣杨秀旭于蕊张晓鹏于长明
- 关键词：鼠疫耶尔森菌免疫原性亚单位疫苗
- 人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达被引量：3
- 2013年
- 目的构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定。方法采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv)。连接pET22b(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot法鉴定表达产物。ELISA检测27G-scdsFv体外抗原特异结合活性和抗体相对稳定性;非竞争酶免法检测抗体亲和力。采用免疫荧光法检测27G-scdsFv体外中和活性。结果测序结果显示获得正确的27G-scdsFv基因。原核表达scdsFv以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的50%。复性后的27G-scdsFv保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,亲和力较其scFv形式略有提升,KD=0.93×10-7mol/L,1 L培养物可获得5 mg scdsFv蛋白。27G-scdsFv的稳定性较scFv形式明显增强。27G-scdsFv在体外可以明显抑制TeNT-Hc与神经元细胞的结合。结论成功构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并获得有活性的目的蛋白,为27G-scdsFv的进一步生物学功能研究奠定基础。
- 王晗于蕊张晓鹏任军谢娜樊红艳张金龙房婷于长明陈薇
- 关键词：原核表达
