欧阳锦凤
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
- 供职机构：华中师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生电子电信更多>>
- 人类博卡病毒(HBoV)非结构蛋白NS1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 目的:克隆、表达、纯化人类博卡病毒(HBoV)非结构蛋白NS1,制备抗NS1多克隆抗体。方法:利用PCR扩增HBoV非结构蛋白NS1基因,将其克隆至pMAL-c2X表达载体上,重组质粒转化大肠杆菌DH10B,IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Amylose Resin亲和层析柱纯化后,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。用间接ELISA法检测抗体效价。结果:原核表达融合蛋白MBP-NS1,并获得了其多克隆抗体,抗体效价达到1∶32000。结论:在原核表达系统中表达、纯化了融合蛋白,制备抗NS1多克隆抗体,为进一步研究该病毒非结构蛋白基因的转录和翻译机制提供可靠的工具。
- 孙彬李京京欧阳锦凤陈莹李毅
- 关键词：克隆原核表达多克隆抗体
- 人博卡病毒结构蛋白VPIU，非结构蛋白ORFX和NP1的原核表达与抗体制备
- 欧阳锦凤
- 文献传递网络资源链接
- 人类博卡病毒HBoV1基因组克隆及启动子活性分析被引量：3
- 2011年
- 人类博卡病毒（Human bocavirus,HBoV）是继细小病毒B19之后,第2个被发现可引起人类疾病的细小病毒。通过PCR扩增方法从患有下呼吸道感染的患儿痰液中鉴定HBoV,以鉴定的阳性样本为模板,利用分子生物学方法构建病毒基因组克隆并进行序列分析。2007年10月？2009年3月从湖北省妇幼保健院共收集941例下呼吸道感染患儿的痰液标本,检测到33份HBoV阳性样品,阳性率为3.51%（33/941）;其中1岁以下婴幼儿患者占阳性样72.7%;构建了含有HBoV中间大片段基因克隆WHL-1,基因序列比对为HBoV1型,序列全长5 299 bp（GenBank Acession No.GU139423）;PCR扩增博卡病毒左端唯一启动子区,分别构建病毒启动子增强型绿色荧光蛋白（EGFP）/荧光素酶报告基因重组载体pGL3-pBoV-EGFP/pGL3-Basic-pBoV,转染哺乳动物细胞,通过检测绿色荧光蛋白表达和荧光素酶活性定性并定量研究人类博卡病毒启动子在哺乳动物细胞中的活性;结果显示,启动子在试验细胞中都具有活性,且比强启动子巨细胞病毒启动子（Cytomegalovirus,CMV）活性更高,在293T细胞中HBoV1启动子活性是CMV的4~5倍;已构建的基因组克隆和病毒启动子在哺乳动物细胞中表现的高活性为下一步的病毒转录、翻译分子机制的研究提供了平台。
- 李京京孙彬欧阳锦凤陈莹韩虎刘凯于李毅
- 关键词：克隆启动子活性
- 人博卡病毒结构蛋白VP1u,非结构蛋白ORFx和NP1的原核表达与抗体制备
- 瑞典科学家Tobias Allander等于2005年10月从下呼吸道感染婴幼儿的分泌物中发现了一种新的细小病毒,即人博卡病毒(HumanBocavirus,HBoV),HBoV是一种DNA病毒,单链线状,病毒粒子无囊膜...
- 欧阳锦凤
- 关键词：人博卡病毒结构蛋白非结构蛋白原核表达
