李京京
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
- 供职机构：华中师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生经济管理农业科学更多>>
- 棉铃虫核多角体病毒泛素基因的克隆表达及抗体制备被引量：4
- 2005年
- 昆虫杆状病毒和痘病毒是目前已知唯一编码泛素基因的病毒。通过PCR方法,克隆了棉铃虫核多角体病毒(HaSNPV)泛素基因(Ubiquitin,Ubi)。序列分析表明,该基因编码区全长252bp,编码83个氨基酸残基,预计分子量为9.24kDa。将泛素基因克隆到原核表达载体pET28a上,构建重组质粒pETUbi,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达融合蛋白。用Histag抗体检测目的蛋白,Westenblot实验证明所表达的蛋白是带有Histag的重组融合蛋白。通过改变IPTG浓度和诱导时间对表达条件进行了优化。利用NI琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化目的蛋白,SDSPAGE鉴定为单一条带,同时用提纯蛋白制备了特异性抗体,为进一步的研究打下基础。
- 李京京姚青杨东叶余泽华陈新文
- 关键词：棉铃虫核多角体病毒泛素克隆原核表达抗血清
- 人类博卡病毒HBoV1基因组克隆及转录、翻译分子机制研究
- 呼吸道病毒是引发婴幼儿急性呼吸道感染疾病的主要病原体，目前仍有60％的小儿呼吸道疾病病理未阐明。2005年瑞典科学家Allander从患呼吸道疾病的婴幼儿感染样本中分离到一种新病毒，命名为人类博卡病毒(Human Boc...
- 李京京
- 关键词：人类博卡病毒基因克隆基因调控
- 文献传递
- 人类博卡病毒(HBoV)非结构蛋白NS1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2010年
- 目的:克隆、表达、纯化人类博卡病毒(HBoV)非结构蛋白NS1,制备抗NS1多克隆抗体。方法:利用PCR扩增HBoV非结构蛋白NS1基因,将其克隆至pMAL-c2X表达载体上,重组质粒转化大肠杆菌DH10B,IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Amylose Resin亲和层析柱纯化后,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。用间接ELISA法检测抗体效价。结果:原核表达融合蛋白MBP-NS1,并获得了其多克隆抗体,抗体效价达到1∶32000。结论:在原核表达系统中表达、纯化了融合蛋白,制备抗NS1多克隆抗体,为进一步研究该病毒非结构蛋白基因的转录和翻译机制提供可靠的工具。
- 孙彬李京京欧阳锦凤陈莹李毅
- 关键词：克隆原核表达多克隆抗体
- 棉铃虫核多角体病毒泛素基因的克隆表达及抗体制备
- 本文采用PCR方法，根据已知HaSNPV泛素基因设计上游引物和下游引物，克隆了棉铃虫核多角体病毒泛素基因。将该基因与pGEM-T载体连接，转化感受态大肠杆菌DH5 α，通过酶切鉴定阳性克隆。该基因在原核细胞表达系统中成功...
- 李京京
- 关键词：棉铃虫核多角体病毒泛素基因抗血清
- 文献传递
- 行为金融框架下的中国证券市场行为特征分析
- 行为金融理论是20世纪80年代兴起的新理论，它结合了心理学、社会学和人类学等学科的研究成果，建立了一系列能够正确反映投资者实际决策行为和市场运行状况的描述性模型，弥补了很多经典金融理论的不足，解释了很多谜团和异像，已逐渐...
- 李京京
- 关键词：行为金融理论证券市场噪声交易羊群效应
- 文献传递
- 宿主细胞泛素系统与病毒相互作用的研究
- 2005年
- 真核细胞中,泛素系统执行对大多数短周期寿命蛋白的选择性降解,且已发现由泛素介导的对蛋白的降解调控在细胞的多种生命过程中起重要作用。病毒侵染宿主细胞后,细胞的泛素系统与一些重要的病毒蛋白相互作用,参与调节病毒的生活周期,如病毒迁移,核酸复制,免疫逃避,出芽等过程。
- 李京京余泽华
- 关键词：泛素系统蛋白降解病毒蛋白出芽
- 家蚕浓核病毒BmDNV-1(伊那株)结构蛋白基因VP4的克隆、表达及抗体制备
- 2009年
- 利用PCR技术扩增出BmDNV-1结构蛋白vp4基因,并将该基因与原核表达载体pMALc2X进行连接,转化大肠杆菌DH10B,获得重组质粒经IPTG诱导表达得到大小为96 000的融合蛋白,融合蛋白经Amylose柱纯化,使用其免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体.从而为进一步研究该病毒结构蛋白基因的转录和翻译机制提供可靠的工具.
- 谢马莉于倩李京京李毅
- 关键词：家蚕浓核病毒结构蛋白克隆蛋白质纯化
- 人类博卡病毒结构蛋白基因VP2的克隆与表达被引量：1
- 2010年
- 采用PCR方法扩增出人类博卡病毒结构蛋白基因VP2,通过双酶切、连接、转化等方法将VP2基因克隆到原核表达载体pMAL-c2x上,构建重组质粒pMAL-c2x-VP2,通过双酶切检测重组质粒构建成功;用0.8 mmol.L-1IPTG诱导融合蛋白表达,经SDS-PAGE检测、Western Blot分析,证明目的蛋白得到了表达。可为目的蛋白的纯化及结构和功能的研究、相应抗体的制备打下坚实的基础。
- 陈莹张丹李京京李毅
- 关键词：人类博卡病毒克隆
- 宿主细胞泛素系统与病毒相互作用的研究被引量：2
- 2007年
- 真核细胞中,泛素系统执行对大多数短周期寿命蛋白的选择性降解,且已发现由泛素介导的对蛋白的降解调控在细胞的多种生命过程中起重要作用。病毒侵染宿主细胞后,细胞的泛素系统与一些重要的病毒蛋白相互作用,参与调节病毒的生活周期,如病毒迁移,核酸复制,免疫逃避,出芽等过程。
- 姜少平李京京
- 关键词：泛素系统蛋白降解病毒蛋白出芽
- 人类博卡病毒HBoV1基因组克隆及启动子活性分析被引量：3
- 2011年
- 人类博卡病毒（Human bocavirus,HBoV）是继细小病毒B19之后,第2个被发现可引起人类疾病的细小病毒。通过PCR扩增方法从患有下呼吸道感染的患儿痰液中鉴定HBoV,以鉴定的阳性样本为模板,利用分子生物学方法构建病毒基因组克隆并进行序列分析。2007年10月？2009年3月从湖北省妇幼保健院共收集941例下呼吸道感染患儿的痰液标本,检测到33份HBoV阳性样品,阳性率为3.51%（33/941）;其中1岁以下婴幼儿患者占阳性样72.7%;构建了含有HBoV中间大片段基因克隆WHL-1,基因序列比对为HBoV1型,序列全长5 299 bp（GenBank Acession No.GU139423）;PCR扩增博卡病毒左端唯一启动子区,分别构建病毒启动子增强型绿色荧光蛋白（EGFP）/荧光素酶报告基因重组载体pGL3-pBoV-EGFP/pGL3-Basic-pBoV,转染哺乳动物细胞,通过检测绿色荧光蛋白表达和荧光素酶活性定性并定量研究人类博卡病毒启动子在哺乳动物细胞中的活性;结果显示,启动子在试验细胞中都具有活性,且比强启动子巨细胞病毒启动子（Cytomegalovirus,CMV）活性更高,在293T细胞中HBoV1启动子活性是CMV的4~5倍;已构建的基因组克隆和病毒启动子在哺乳动物细胞中表现的高活性为下一步的病毒转录、翻译分子机制的研究提供了平台。
- 李京京孙彬欧阳锦凤陈莹韩虎刘凯于李毅
- 关键词：克隆启动子活性
