韩瑞枝
- 作品数：20 被引量：25H指数：3
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程电子电信更多>>
- 环糊精葡萄糖基转移酶182位点定点改造催化合成糖基化染料木素被引量：4
- 2022年
- 染料木素及其单糖苷衍物在食品和医药领域具有重要作用,但难溶于水的特性极大地限制了其应用范围,研究表明糖基化反应可有效提高其水溶性。文中针对来源于软化芽孢杆菌的环糊精葡萄糖基转移酶,研究其对染料木素单糖苷衍生物槐角苷的糖基化反应。通过对D182位点的定点饱和突变,突变酶D182C较WT转化率提高了13.42%,主要糖基化产物(槐角苷单糖苷、二糖苷、三糖苷)分别提高了39.35%、56.05%和64.81%。酶学性质研究发现,D182C较WT的环化、水解、歧化活力均有所提高。且最适pH和温度分别为6和40℃。动力学研究发现,D182C针对底物(糖基供体和受体)的K_(m)值较WT均有所降低,且催化效率k_(cat)/K_(m)则明显提高,说明D182C对底物的亲和力相较于WT有大幅提升。同源建模及分子对接结果表明,突变酶D182C糖基化效率提高的原因可能与底物作用力增加有关。
- 柴宝成姜钰琳倪晔韩瑞枝
- 关键词：染料木素槐角苷环糊精葡萄糖基转移酶糖基化反应
- 环糊精葡萄糖基转移酶在大肠杆菌中的异源表达及催化染料木素的糖基化研究
- 染料木素(又名金雀异黄素，染料木黄酮)是一种常见的大豆异黄酮，具有较高的活性功能。它在人体和动物细胞中具有广泛的药理学功效，例如具有抗肿瘤，预防心血管疾病，预防绝经后疾病及抗骨质疏松等功能。然而，它在水溶液中溶解度极低，...
- 葛彬彬韩瑞枝姜明扬许国超董晋军倪晔
- 随机-半理性组合突变改造ω-转氨酶催化合成(R)-1-(1-萘基)乙胺被引量：1
- 2020年
- (R)-1-(1-萘基)乙胺是合成拟钙剂药物盐酸西那卡塞的关键手性中间体,利用ω-转氨酶不对称还原1-萘乙酮合成(R)-1-(1-萘基)乙胺具有较好的应用前景。文中针对节杆菌属Arthrobacter sp.来源的ω-转氨酶,采用随机突变和半理性设计相结合的策略,获得了催化效率和热稳定性提高的突变酶F225M、C281I和F225M/C281I。与WT相比,双突变体F225M/C281I的kcat提高85%,Km下降56%,催化效率kcat/Km提高3.42倍。此外,F225M/C281I催化10mmol/L1-萘乙酮反应24h的转化率提高了22%。分子对接和分子动力学模拟结果表明,F225M/C281I相比于WT增加了与底物1-萘乙酮之间的Pi-Pi相互作用力,导致其催化效率的提高;而且突变酶F225M/C281I的134–139位点残基的均方根波动(RMSF)相比WT明显降低,与半衰期的略微提高相关。
- 曹旭东韩瑞枝方红辉倪晔
- 关键词：随机突变
- arcA基因提高大肠杆菌对有机溶剂的耐受性被引量：1
- 2016年
- 【目的】将来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida JUCT1)的基因arc A(编码精氨酸脱亚胺酶)整合到Escherichia coli JM109(DE3)基因组中,以提高该菌对有机溶剂的耐受性。【方法】以P.putida JUCT1的基因组为模板扩增基因arc A,并与p ET-20b(+)连接后导入E.coli JM109(DE3)中,验证该基因提高E.coli JM109(DE3)对有机溶剂的耐受性。利用Red同源重组的方法将arc A整合到E.coli JM109(DE3)基因组中。【结果】E.coli JM109(DE3)/p ET-20b(+)-arc A在添加了2.0%(体积比)环己烷、0.1%(体积比)甲苯、4.0%(体积比)萘烷和0.1%(体积比)丁醇的培养基中培养8 h后,其OD660由初始的0.2分别上升到0.8、0.9、1.8和1.3。将arc A成功整合到E.coli JM109(DE3)基因组中,获得了具有较好遗传稳定性的溶剂耐受E.coli JM109(DE3)宿主菌株。【结论】外源基因arc A能提高大肠杆菌菌株的有机溶剂耐受性,为工业化应用中耐溶剂微生物菌株的构建提供了实验依据和理论基础。
- 张法韩瑞枝许国超董晋军倪晔
- 关键词：精氨酸脱亚胺酶RED同源重组有机溶剂耐受性恶臭假单胞菌大肠杆菌
- 环糊精糖基转移酶-淀粉酶CBM区域嵌合酶的构建以提高2-O-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸的合成效率
- 本文基于融合PCR技术,以来自于Alkalimonas amylolytica 的α-淀粉酶碳水化合物结合区域(CBMAmy)与来自于Paenibacillus macerans 的环糊精糖基转移酶(CGTase)为基础...
- 韩瑞枝刘龙李江华堵国成陈坚
- 谷氨酸棒状杆菌CRISPR-Cpf1和Cre/loxP基因敲除技术的比较被引量：5
- 2019年
- 【背景】谷氨酸棒状杆菌的基因敲除系统较为匮乏且效率不高,难以对其进行代谢工程改造,不利于高性能工业菌株的构建及规模生产。【目的】分别采用CRISPR-Cpf1和Cre/loxP基因敲除系统对谷氨酸棒状杆菌ATCC13032(CorynebacteriumglutamicumATCC13032)基因组上的argR和argF基因进行敲除,比较两种敲除方法的优缺点,为合理选择敲除系统提供依据。【方法】特异性重组的Cre/loxP敲除系统是首先利用同源重组将基因组上的靶基因替换为两端带有重组位点loxP的kanR片段,然后由重组酶Cre识别loxP位点并发生重组反应,从而去除替换到基因组上的kanR片段,进一步利用质粒的温敏特性将其消除,从而实现靶基因的敲除。CRISPR-Cpf1敲除系统是利用Cpf1对pre-crRNA进行加工,形成的成熟crRNA引导Cpf1识别和结合到靶DNA的特定序列上并切割双链DNA分子,通过同源重组作用去除靶基因,基于质粒自身的温敏特性将其消除,从而完成基因敲除的整个过程。【结果】Cre/lox P系统可在8N+2 d内完成N轮迭代基因敲除,而CRISPR-Cpf1系统可在5N+2d内完成N轮迭代基因无痕敲除,理论上还可以一次对多个靶位点进行编辑,效率更高,但存在同源重组效率较低、假阳性率高等缺点。【结论】与Cre/loxP系统相比,CRISPR-Cpf1辅助的同源重组基因敲除方法可省时、省力地实现基因的无痕敲除,理论上还可实现多个基因的同时敲除、总体效率更高,然而编辑效率还有提高的空间。
- 占米林阚宝军张辉董晋军许国超韩瑞枝倪晔
- 关键词：谷氨酸棒状杆菌同源重组基因敲除
- Clostridium saccharobutylicum DSM 13864细胞表面理化特性及固定化细胞产丁醇的性能被引量：1
- 2015年
- 糖丁基梭菌Clostridium saccharobutylicum DSM 13864能利用多种糖类为底物发酵产丁醇。本文研究了该菌体细胞表面的理化特性,并以砖块作为细胞固定化材料进行丁醇发酵。采用细菌吸附有机溶剂（MATS）法证明糖丁基梭菌细胞表面有强烈的亲水性,并且等电点在p H值为3左右,这些特性有利于菌体与表面亲水多孔的砖块吸附。在60g/L葡萄糖发酵培养基中,以5~8目砖块作为固定化材料,流速为1.1L/min,发酵48h后,丁醇的浓度、得率和生产率分别达到11.02g/L、0.18g/g和0.23g/（L？h）,相比悬浮细胞发酵分别提高了10.53%、5.88%和9.52%。结果表明：砖块作为一种固定化材料可有效提高糖丁基梭菌的发酵产丁醇水平。
- 陈强董晋军许国超韩瑞枝倪晔
- 关键词：丁醇固定化
- 糖基转移酶UGT73C5在大肠杆菌中的可溶性表达研究被引量：1
- 2023年
- 络塞是一种抗高原反应药物的主要活性成分,可通过尿苷二磷酸糖基转移酶UGT73C5催化肉桂醇糖基化反应合成。然而UGT73C5在大肠杆菌宿主中可溶性表达极差,严重限制了其工业应用。该研究分别通过与分子伴侣共表达和与助溶蛋白标签融合表达的方式,提高UGT73C5在Escherichia coli BL21(DE3)中的可溶性表达。结果显示,除质粒pKJE7外,与分子伴侣质粒pG-KJE8、pGro7和pG-TF2共表达后均可提高UGT73C5酶活力,分别为原始酶活力(18.56 U/g细胞)的1.27、1.18、1.37倍。此外,利用硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)和谷胱甘肽巯基转移蛋白(glutathione S-transferase,GST)两种助溶蛋白标签,构建的融合酶Trx-UGT73C5和GST-UGT73C5的酶活力为原始酶活力的1.45、2.54倍,且纯化后的比酶活力为原始酶的80%~90%。最后,在2 mmol/L肉桂醇合成络塞的反应中,相同浓度细胞破碎液(粗酶)融合酶GST-UGT73C5比原始酶催化效率更高,4 h后转化率可以达到90%以上,最终转化率达到93.6%。因此,助溶蛋白标签融合表达法可有效提高UGT73C5在大肠杆菌中的可溶性表达,且融合酶GST-UGT73C5在络塞的酶法合成中具有更大的应用潜力。
- 方红辉倪晔周婕妤董晋军许国超张兆俊韩瑞枝
- 关键词：糖基转移酶可溶性表达分子伴侣肉桂醇
- 转氨酶的分子改造及用于(R)-1-(1-萘基)-乙胺的合成
- 盐酸西那卡塞是第二代拟钙剂药物,用于治疗进行透析的慢性肾病患者的继发性甲状旁腺功能亢进症及用于治疗甲状旁腺癌患者的高钙血症。其分子结构中含有一个手性中心,临床上使用的是其单一对映体(R)-西那卡塞,(R)-西那卡塞的手性...
- 曹旭东韩瑞枝方红辉倪晔
- 关键词：转氨酶分子改造
- 文献传递
- 产D-海因酶微生物的筛选及其催化特性
- 2016年
- 为获得高活性和立体选择性海因酶生产菌株,首先采用氨基酸关环法合成了数种5'-单取代海因衍生物及N-氨甲酰-氨基酸,建立了相关液相色谱检测方法。然后以实验室保藏的野生菌株出发,利用底物诱导的方法筛选到6株具有D-海因酶活性的野生菌,其中荧光假单胞菌产生的D-海因酶具有较好的底物谱,较高的活性和立体选择性。经优化后,其最适产酶温度为30℃,培养时间为12 h,发酵活力达到92.1 U/L。该菌催化D-海因水解的最适反应温度为60℃,pH 8.5。在50 m L体系中,利用0.25 g菌体(干重)可对映选择性水解20 mmol/L对羟基苯海因底物,反应3 h转化率达到98%。
- 李磊许国超韩瑞枝倪晔
- 关键词：D-海因酶D-氨基酸荧光假单胞菌
