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刘振华
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1
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供职机构:
苏州卫生职业技术学院
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广东省自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
马文丽
南方医科大学基础医学院基因工程...
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pp GalNacT-10基因真核表达载体的构建及表达
2012年
目的:构建pp GalNacT-10基因真核表达载体。方法:采用PCR方法合成含有酶切位点(XbaⅠ、EcoRⅠ)的ppGalNacT-10cDNA。构建pMD19T-GalNacT-10-ORF和pMD19T-GalNacT-10-antisense,鉴定及测序证实cD-NA片段大小和序列。双酶切目的载体pcDNA3.1后,与GalNacT-10-ORF和GalNacT-10-antisense片段进行连接,构建正义和反义真核表达载体pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF和pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense,将其分别转染293T细胞,Westernblot法检测ppGalNacT-10蛋白的表达。结果:pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF和pcDNA3.1-GalNacT-10-an-tisense包含大小、序列正确的pp GalNacT-10片段;ppGalNacT-10蛋白在转染pcDNA3.1-GalNacT-10-ORF的293T细胞中高表达,在转染pcDNA3.1-GalNacT-10-antisense的293T细胞中表达降低。结论:成功构建了ppGalNacT-10基因正义和反义真核表达载体。
高媛
刘振华
冯菁华
李晓云
孙其
张宝
郑文岭
马文丽
关键词:
PP
真核表达载体
293T细胞
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