汪汇慧
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 降低诱导温度提高毕赤酵母甲醇代谢关键酶基因转录水平和猪-α干扰素生产性能被引量：1
- 2011年
- 以一株表达猪-α干扰素（pIFN-α）重组毕赤酵母为研究对象，考察了诱导温度对pIFN-α表达、细胞代谢活性及甲醇代谢关键酶的影响。在5L发酵罐开展毕赤酵母高密度流加培养生产表达pIFN-α研究，利用实时PCR技术对不同诱导温度、诱导稳定期的胞内甲醇代谢关键酶（包括解毒酶）基因转录水平进行定量分析。低温（20℃）可以同时提高细胞的代谢活性和猪-α干扰素的表达水平，低温（20℃）下最高pIFN-α抗病毒活性达到5．57×10^6IU／mL，是30℃常温诱导下最高抗病毒活性（2．9×10^5IU／mL）的19．2倍；相比于30℃常温诱导，20℃下醇氧化酶（AOX）、甲醛脱氢酶（FLD）、甲酸脱氢酶（H）H）、过氧化氢酶（CAT）及二羟基丙酮合成酶（DHAS）基因的转录水平明显提高，其中CAT和DHAS转录水平的增加尤为显著。低温诱导提高pIFN-α表达原因在于：（1）甲醇利用速度快，细胞代谢活性强；（2）低温诱导下甲醛产能途径和解毒能力得到加强，为合成细胞物质提供更多的能量；（3）甲醛同化途径关键酶（DHAS）转录水平在低温下增强更为显著，促使更多的碳流向细胞合成和外源蛋白表达。
- 金虎戴科科汪汇慧李震段作营史仲平
- 关键词：毕赤酵母转录
- 降低诱导温度对改善猪α-干扰素发酵生产性能和ATP再生效率的作用被引量：4
- 2011年
- 在10 L发酵罐、控制甲醇浓度的条件下,考察了诱导温度对毕赤酵母发酵生产猪α-干扰素(pIFN-α)性能的影响。结果表明,温度对pIFN-α表达的影响明显,20℃低温有利于pIFN-α的表达,该条件下pIFN-α最高活性可达1.5×106IU·ml-1,是30℃传统诱导生产时最高活性(1.0×104 IU·ml-1)的150倍。发酵状态参数的在线测量和代谢分析结果表明,20℃低温诱导环境下,细胞代谢活性高、甲醇比消耗速度(0.036 h-1)比30℃时的(0.021 h-1)大;同时,低温诱导下的CO2释放速度(CER)和呼吸商(RQ)均较低,表明改变诱导温度可以改变胞内代谢流的分配。更重要的是,低温诱导既可以增加目标蛋白表达支路的碳代谢流,又可以提高甲醇能量代谢支路中产生的NADH利用效率、改善毕赤酵母生产pIFN-α系统的ATP再生效率和速度,实现了目标蛋白的高效表达。
- 刘国强金虎高敏杰戴科科汪汇慧李震史仲平
- 关键词：毕赤酵母
- 甲醇/山梨醇共混流加诱导改变毕赤酵母生产猪α干扰素过程的代谢产能途径强化发酵性能被引量：5
- 2012年
- 旨在探讨毕赤酵母生产猪α干扰素过程的代谢产能规律及其对发酵性能的影响。在10 L罐下,开展了不同诱导条件下的毕赤酵母高效发酵生产猪α干扰素过程的代谢酶学和能量再生分析研究。结果表明:甲醇单独诱导条件下、将诱导温度从30℃降低到20℃,胞内醇氧化酶(AOX)、甲醛脱氢酶(FLD)和甲酸脱氢酶(FDH)的比活性增加显著,细胞的甲醇代谢和甲醛异化产能能力、猪α干扰素抗病毒活性大幅提高,最高抗病毒活性达到1.4×106IU/mL,约为30℃诱导条件下的10倍。30℃、甲醇/山梨醇共混流加下,主要供能途径由甲醇单独诱导时的甲醛异化代谢转向TCA循环,甲醛异化供能途径被弱化、毒副产物甲醛的生成积累得到抑制,走向目标蛋白合成途径的甲醇分配比例得到提高。此时,最高抗病毒活性达到1.8×107IU/mL,是30℃甲醇单独诱导下最高活性的100倍以上。更加重要的是,共混流加诱导可以在常温、使用空气供氧的条件下进行,发酵成本明显下降、整体发酵性能改善显著。
- 汪汇慧金虎高敏杰戴科科董世娟于瑞嵩李震史仲平
- 关键词：毕赤酵母甲醇山梨醇猪Α干扰素
