阳毅敏
- 作品数：12 被引量：7H指数：1
- 供职机构：浙江大学更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 一种蜱传非洲猪瘟病毒三重荧光定量PCR检测试剂盒
- 本发明提供一种蜱传非洲猪瘟病毒三重荧光定量PCR检测试剂盒，包含PCR反应液、热启动Taq DNA聚合酶、探针法荧光定量PCR配套Buffer、蜱虫18S rRNA基因特异性引物和荧光探针、非洲猪瘟病毒B646L基因特异...
- 杜爱芳王钊马光旭杨怡陈学秋阳毅敏
- 文献传递
- 贝氏隐孢子虫Rhomboid基因的克隆与生物信息学分析
- 2015年
- 将Gen Bank中发表的C.parvum、C.hominis和C.muris的菱形体蛋白(Rhomboid,ROM)基因序列进行比对分析,设计合成该基因保守片段的1对特异性引物,以贝氏隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增出CbROM基因保守片段,采用染色体步移技术获得基因片段3'端和5'端核苷酸序列,并对所得序列进行测序、拼接与生物信息学分析。结果显示,CbROM基因ORF长度为1 422 bp,编码473个氨基酸,蛋白质理论相对分子质量为52 700,等电点为8.65,是疏水性蛋白质,含有7个串连的跨膜螺旋区,无信号肽;该基因含有典型的菱形体蛋白相关保守结构域,属于菱形体蛋白酶家族;功能位点分析结果显示,CbROM蛋白序列包含6个N-糖基化位点,2个c AMP、c GMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,8个蛋白激酶C磷酸化位点,7个酪蛋白激酶II磷酸化位点和10个N-豆蔻酰化位点;二级结构中包含α-螺旋38.27%,β-折叠16.7%和无规则卷曲45.03%。本试验获得的贝氏隐孢子虫的Rhomboid基因序列,为该基因功能的进一步研究及其基因工程疫苗的研制奠定基础。
- 薛雪阳毅敏陈学秋杜爱芳
- 关键词：贝氏隐孢子虫染色体步移生物信息学分析
- 弓形虫SAG1重组抗体制备及抗原表位鉴定被引量：7
- 2021年
- 重组抗体相较于多克隆抗体和杂交瘤单克隆抗体具有更好的稳定性和特异性,本研究以弓形虫表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)为靶标制备了重组抗体。将弓形虫SAG1(45~198aa)的基因序列被克隆到pET-32a原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞后获得弓形虫SAG1(45~198aa)重组蛋白。重组蛋白经镍柱纯化后通过皮下注射免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,制备SAG1单克隆杂交瘤。通过兼并引物克隆杂交瘤抗体的重链和轻链序列得到重组抗体表达质粒,将重组抗体表达质粒转染HEK293T细胞获得重组抗体。通过pET-32a和pCMV-EGFP质粒表达SAG1多肽片段鉴定重组抗体识别的SAG1抗原表位。结果显示,免疫印迹和免疫荧光试验确定SAG1重组抗体的特异性,SAG1重组蛋白的抗原表位序列为SAG1(84~90aa)。本研究展示了一种简便的重组抗体制备过程,可为其他蛋白的抗体制备提供借鉴,制备的重组抗体具有详细抗原表位信息,有望成为弓形虫诊断的工具抗体。
- 庄浩瀚潘灵韬姚晨倩陈学秋阳毅敏赵明秀林蜜杨怡杜爱芳
- 关键词：弓形虫SAG1
- 一种缺失MnmE基因的弓形虫弱毒活疫苗及构建方法
- 本发明公开了一种缺失MnmE基因的弓形虫弱毒活疫苗及构建方法，该疫苗含有缺失了tRNA修饰GTP酶MnmE基因的弓形虫弱毒虫株，所述tRNA修饰GTP酶MnmE基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述弓形虫基因...
- 杜爱芳阳毅敏夏洁马光旭陈学秋史悦
- 一种基于ITS-2基因的羊肝片吸虫病PCR快速检测试剂盒及应用
- 一种基于ITS‑2基因的羊肝片吸虫病PCR快速检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含：PCR试剂管、100bp DNA Marker、250bp DNA Marker、GoldView DNA染料、溴酚蓝上样缓冲液、标准品...
- 杨怡杜爱芳阳毅敏李闵薇郭筱璐陈学秋孙洪超
- 文献传递
- 贝氏隐孢子虫重组质粒pEGFP-CbROM的免疫保护性研究
- 本课题组前期成功克隆了贝氏隐孢子虫(C.Bailey) Rhomboid基因,构建了真核表达载体pEGFP-CbROM,其能够在HEK293细胞中表达.本研究利用已构建好的重组质粒pEGFP-CbROM免疫雏鸡,观察其对...
- 阳毅敏杜爱芳
- 一种细粒棘球蚴检测试剂盒及应用
- 本发明提供一种细粒棘球蚴检测试剂盒，由无菌去离子水、PCR反应液、TaqDNA聚合酶、GoldViewDNA染料、溴酚蓝上样缓冲液、标准品、对照品组成，PCR反应液由PCR缓冲液、MgCl<Sub>2</Sub>、dNT...
- 杜爱芳俞颖超卓洵辉阳毅敏
- 文献传递
- 一种基于rhomboid基因的隐孢子虫病PCR快速检测试剂盒及应用
- 本发明提供了一种基于rhomboid基因的隐孢子虫病PCR快速检测试剂盒，可灵敏、快速、准确检测隐孢子虫的PCR。本发明提供的试剂盒能够运用于隐孢子虫病原的大规模检测，也可用于隐孢子虫病的分子流行病学调查及药物疫苗效果监...
- 杨怡杜爱芳阳毅敏陈学秋周静茹赵明
- 文献传递
- 弓形虫tRNA硫化修饰酶基因敲除虫株的构建方法及用途
- 本发明公开了弓形虫tRNA硫化修饰酶基因敲除虫株的构建方法及用途，该方法敲除了弓形虫tRNA硫化修饰酶基因，所述弓形虫tRNA硫化修饰酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述弓形虫基因敲除虫株在tRNA硫化修...
- 杜爱芳阳毅敏史悦姚晨倩陈学秋
- 弓形虫泛素特异性蛋白酶TgUSP10的定位及其功能被引量：1
- 2022年
- 利用CRISPR/Cas9技术构建弓形虫泛素特异性蛋白酶TgUSP10的内源性标记虫株,经单克隆后通过PCR和Western blot对内源性标记虫株进行鉴定,并通过间接免疫荧光试验分析了TgUSP10蛋白的亚细胞定位与表达水平;同时,构建TgUSP10敲除虫株,经单克隆后进行PCR鉴定,并通过噬斑、黏附/入侵、复制和逸出试验评估TgUSP10缺失对弓形虫体外增殖的影响。IFA结果显示,TgUSP10定位于细胞质,并在G1期、S期和分裂后期表达量较高;成功构建了TgUSP10敲除虫株,与RH△ku80虫株相比,TgUSP10敲除虫株形成噬斑的能力显著减弱;进一步分析体外增殖的具体过程后发现,TgUSP10敲除虫株的复制能力显著减弱,而黏附/入侵和逸出能力没有显著变化。结果表明,成功构建了TgUSP10的内源性标记虫株,TgUSP10定位于虫体细胞质,并对弓形虫体外增殖具有重要作用,为后续进一步阐明其功能和作用机制奠定基础。
- 陈璐璐孙洪超阳毅敏盛楷茵姚晨倩陈学秋杨怡杜爱芳
- 关键词：弓形虫
