李广泽
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
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- 用柞蚕蛹生产外源基因产物的方法
- 一种用柞蚕蛹生产外源基因产物的方法，它组建了柞蚕核型多角体病毒表达载体，利用柞蚕蛹为活体宿主，将外源基因克隆到作蚕核型多角体病毒表达载体后，将野生的柞蚕核型多角体病毒DNA与重组质粒DNA一起转染柞蚕细胞或柞蚕蛹，形成载...
- 张春发刘淑珊范琦李广泽
- 文献传递
- 柞蚕NPV转移载体组建及外源基因在Sf9细胞、柞蚕卵巢原代细胞和蛹体中的表达被引量：12
- 1992年
- 根据对载有ApNPV核多角体蛋白基因的片段的酶谱和核苷酸序列分析结果,采用人工合成寡核苷酸引物引导的点突变方法,去掉了该基因的起始密码子(ATG突变为ATT),经系列克隆组建了pApM740转移载体,其外源基因插入位点为nt+141(BamHI)。系用多聚酶链反应(Polymerase Chain Rea-ction简称PCR)技术,分别将nt+2～+140,nt+9～+140、和nt+37～+140切掉,组建了pApM740、741、748和736转移载体,其外源基因克隆位点分别为nt+1、+8和+36(均为BamHI切点)。将IL-4、DE基因分别克隆到pApM740、741、748和736载体中,并进行了转染表达实验:(1)将载有DE基因的上述四种载体质粒DNA分别与AcNPV_(WT)DNA共转染Sf9细胞、经免疫抗体荧光检测,供试4个载体所载DE基因均得到表达;(2)将pApM741-IL_4和pApM748-IL_4重组载体质粒DNA分别与ApNPV_(WT)DNA共转染柞蚕卵巢原代细胞,待多角体出现后,用PCR法检测病毒基因,证实IL-4基因已整合到ApNPV DNA基因组中;(3)将pApM748-DE重组载体质粒DNA与ApNPV _(WT)DNA共转染柞蚕蛹获得成功。对病蛹病毒DNA进行PCR检测,证实DE基因已整合到病毒基因组中;取病蛹体液,用免疫沉淀及Western blotting方法检测DE蛋白,证实DE蛋白确已被表达。
- 张春发刘淑珊范琦王林美李文利李广泽
- 关键词：柞蚕核型多角体
- 柞蚕核型多角体病毒载体表达系统基因工程研究进展被引量：3
- 1995年
- 柞蚕是一种野外饲养的经济昆虫，它以蛹滞育越冬，主要分布在我国东北部山区。我国柞蚕年产茧量６万ｔ左右，占世界柞蚕茧产量的９０％以上。柞蚕核型多角体病毒（ＡｐＮＰＶ）属杆状病毒科Ａ亚组，是柞蚕脓病的病原体，对柞蚕蛹十分敏感。建立柞蚕核型多角体病毒载体表达系统，以柞蚕蛹为宿主昆虫进行外源基因的大量表达生产，具有成本低、安全、易管理，可工业化生产等特点。本文概述柞蚕核型多角体病毒载体基因工程研究的进展，其中包括核型多角体蛋白基因的克隆，核苷酸序列分析，ｍＲＮＡ起始点的确定，转移载体的组建及所载外源基因在昆虫细胞和柞蚕体内的表达等。
- 张春发刘淑珊范琦李广泽
- 关键词：病毒蛋白基因蚕病
- 综合利用是新世纪柞蚕业发展的新动力
- ＜正＞ 柞蚕业的发展,已有几百年的历史,二十世纪是柞蚕业发展的盛期,1915—1925年产量最高,每年产10万吨左右.柞蚕业发展的过程中,山东人民创造了一套比较完整的柞蚕放养法和缫丝、织绸技术.辽宁省东部山区气候最适宜饲...
- 李树英李广泽
- 文献传递
- 用柞蚕蛹生产外源基因产物的方法
- 一种用于基因工程的用柞蚕蛹生产外源基因产物的方法，它组建了柞蚕核型多角体病毒表达载体，利用柞蚕蛹为活体宿主，将外源基因克隆到柞蚕NPV表达载体后，将野生的ApNPV DNA与重组质粒DNA一起转染柞蚕细脆或柞蚕蛹，形成载...
- 张春发刘淑珊范琦李广泽
- 文献传递
- 柞蚕NPV核多角体蛋白基因核苷酸序列分析及其mRNA转录起始点的确定被引量：8
- 1992年
- 采用DNA双脱氧法,对所克隆的载有ApNPV核多角体蛋白基因片段进行了核苷酸序列分析,并与AcNPV和BmNPV核多角体蛋白基因序列进行了比较。结果表明,ApNPV核多角体蛋白结构基因由735个核苷酸编码序列(编码245个氨基酸)组成,其序列与AcNPV和BmNPV的核多角体蛋白基因编码序列相比同源性较高,分别为79.6％和81.6％;但其5′端和3′端两侧翼序列与AcNPV和BmNPV相比差异显著,特别是控制该基因表达的5′端启动子部分调控序列(nt—2～—61):AcNPV与BmNPV完全相同,而ApNPV在此区域却有20个核苷酸序列发生变异,并且在对该基因表达起决定性作用的8个高度保守核苷酸序列(nt—44～—51),有两处发生自然突变。经核苷酸序列推测出的ApNPV核多角体蛋白氨基酸序列与AcNPV、BmNPV核多角体蛋白氨基酸序列的差异,同其三者之间的核苷酸序列的差异的比率降低10％。采用引物延伸法,对ApNPV核多角体蛋白mRNA转录起始点进行了测定,确定其位于该基因调控序列12个核苷酸高保守区的nt—50位点与AcNPV相似。
- 张春发范琦刘淑珊李文利王林美李广泽
- 关键词：柞蚕核多角体病毒蛋白基因
