方建
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
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- 青稞CHI基因的克隆及原核表达分析被引量：1
- 2015年
- 为了进一步了解CHI基因在青稞黄酮合成中所起的作用,以青稞品系94-19-1为材料,通过同源克隆技术分离CHI基因,并对分离得到的CHI基因进行生物信息学分析及原核表达。结果表明,从青稞94-19-1中克隆得到的CHI基因编码区长为696bp,编码231个氨基酸。序列分析表明,青稞CHI基因有4个碱基和大麦不同,导致1个氨基酸发生改变。SDS-PAGE检测结果表明,将该基因克隆到表达载体pET-32a上,并转化大肠杆菌BL21后,经诱导可成功表达出融合蛋白。
- 李鹏牟利方建张鹍飞刘新春袁金娥冯宗云
- 关键词：青稞查尔酮异构酶克隆原核表达
- 青稞CHS基因的克隆及原核表达分析
- 2015年
- 为进一步研究查尔酮合酶(Chalcone synthase,CHS)在黄酮化合物代谢过程中的作用,以青稞94-19-1为材料,通过同源克隆技术分离CHS基因,并对分离得到的CHS基因进行生物信息学分析及原核表达。结果表明,从青稞94-19-1中克隆得到的CHS基因编码区长为1 197bp,编码398个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白质分子量为43.479kDa,预测等电点(pI)为5.92,是酸性蛋白;该酶蛋白体外红细胞中的半衰期为30h,不稳定系数(II)大于40,属于不稳定蛋白;平均亲水指数为-0.090,是亲水性的蛋白。SDS-PAGE检测结果表明,将该基因克隆到表达载体pET-32a上,并在大肠杆菌BL21中表达,可得到64kDa左右的融合蛋白,在IPTG诱导浓度为1.0mmol·L-1时,最佳诱导时间为3h。
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- 关键词：青稞查尔酮合酶同源克隆原核表达
- 青稞OMT1基因克隆及原核表达分析被引量：8
- 2017年
- 类黄酮O-甲基转移酶(FOMT)是一种在植物甲基化黄酮代谢合成中有着重要作用的酶,但在中国青藏高原的特色作物青稞中研究较少。为了更好了解该酶及编码基因在青稞中的生理功能及作用,以高总黄酮青稞品系94-19-1为材料,通过RT-PCR扩增、克隆得到青稞OMT1基因的ORF序列。结果表明,该基因ORF长1 071 bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子量为38.65 KDa,等电点为5.33。序列比对分析发现,所克隆的基因与NCBI数据库收录的大麦Hv OMT1基因有99.44%的一致性,氨基酸序列存在5个残基差异,编码的蛋白序列具有OMT蛋白家族典型的保守结构域。进一步将该基因连接到原核表达载体转化大肠杆菌,最终成功将该基因所编码的蛋白在大肠杆菌诱导表达,并利用亲和层析柱分离技术,将该表达蛋白进行了纯化。这为进一步研究该酶蛋白功能和选育高品质青稞品种奠定了基础。
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- 关键词：青稞分子克隆原核表达
- 青稞查尔酮合酶基因的克隆与原核表达
- 青稞(Hordeum vulgareL var.nudum Hook.F)是我国青藏高原地区对多棱裸粒大麦的统称，即裸大麦。青稞不仅属于“三高两低”（高蛋白、高纤维、高维生素、低脂肪和低糖）食品，更含有丰富的功能活性成分...
- 方建
- 关键词：青稞查尔酮合酶原核表达
- 文献传递
- 青稞F7-OMT基因的克隆及原核表达分析被引量：4
- 2016年
- 类黄酮7-O-甲基转移酶(F7-OMT)具有甲基转移酶功能,能催化底物类黄酮甲基化产生植物抗毒素,提高植物的抗菌性。为了给进一步研究该酶蛋白的功能奠定基础,以青稞"94-19-1"为材料,采用同源克隆方法得到青稞F7-OMT基因编码片段。生物信息学分析表明,青稞F7-OMT开放阅读框(ORF)全长为1173bp,编码390个氨基酸,蛋白分子质量为42 207.8Da,等电点pI为5.36,无信号肽序列,具有甲基转移酶2(Methyltransf_2,pfam00891)和二聚化(Dimerization,pfam08100)保守域。通过亚克隆将F7-OMT连接到表达载体pET-32a上,构建pET-32a-F7-OMT融合表达载体,在E.coli BL21(DE3)pLysS中诱导表达,并采用亲和层析纯化法得到纯化蛋白。
- 牟利张鹍飞李鹏方建刘新春冯宗云
- 关键词：青稞生物信息学分析
