目的建立ploy(A)聚合酶加尾的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测血清miR-7,并作临床初步应用。方法用Trizol试剂提取血清总RNA。miR-7ploy(A)聚合酶加尾逆转录获得cDNA,进行SYBR Green Ⅰ实时定量PCR扩增检测。制作C.elegans-miR-39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线,绝对定量血清中miR-7的表达水平。结果该方法能定量检测血清miR-7表达水平,熔解曲线呈单峰,PCR扩增产物特异,在10~3copies/uL至10~6copies/uL范围内有良好的线性关系(r^2=0.995),并且检测重复性好。糖尿病患者血清中miR-7表达水平明显高于健康体检者(P<0.05)。结论所建立的ploy(A)聚合酶加尾SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法能敏感、特异地检测血清中miR-7的表达水平,为下一步临床应用的研究奠定了方法学基础。
