刘永飞
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：天津大学化工学院更多>>
- 发文基金：中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 流感病毒NS1蛋白稳定表达的A549细胞系建立被引量：1
- 2013年
- A型流感病毒的NS1(Nonstructurol 1 protein,NS1)蛋白是病毒复制、毒力等的重要调节蛋白.运用RT-PCR方法扩增A/Beijing/501/2009(H1N1)流感病毒NS1基因,克隆至真核表达载体pCMV-HA,用Lipofectamine2000将线性化pCMV-HA-NS1与neo基因共同转染A549细胞,通过G418筛选获得阳性重组细胞,并采用PCR、RT-PCR、Western blot技术检测重组细胞中NS1蛋白的表达,通过免疫荧光技术观察NS1蛋白在细胞中的定位.PCR、RT-PCR检测显示NS1基因成功整合进入细胞基因组,并转录为mRNA;Western blot检测显示重组细胞系稳定表达NS1蛋白,免疫荧光显示NS1蛋白定位于细胞核内.表明通过G418筛选,成功构建稳定表达NS1蛋白的重组A549-HA-NS1细胞系,且NS1蛋白定位于细胞核内,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定基础.
- 李志辉曾琳姣王慧煜梅琳刘永飞韩雪清
- 关键词：A型流感病毒NS1蛋白A549细胞系
- 荧光定量PCR技术检测PRRS变异病毒的研究被引量：1
- 2011年
- 为了能准确、快速的检测nsp2基因缺失的猪繁殖与呼吸系统综合征变异病毒(PRRSV),在nsp2基因核苷酸序列上设计了一条上游引物(nsp2-1)和两条下游引物(nsp2-2,nsp2-3),其中一条下游引物(nsp2-2)设计在缺失碱基序列区域。通过条件优化建立了区分经典株和高致病性nsp2基因缺失株的PCR方法;并将最优化条件运用于SYBR Green荧光定量PCR实验,建立了根据融解曲线鉴别nsp2缺失变异株的荧光定量PCR方法,可检出3～6个基因拷贝。
- 刘永飞黄金海梁智选李秀梅杨爱华郭立力
- 关键词：PRRSVNSP2基因SYBR
- 荧光定量PCR技术检测PRRS变异病毒的研究
- 为了能准确、快速的检测nsp2基因缺失的猪繁殖与呼吸系统综合征变异病毒(PRRSV),在nsp2基因核苷酸序列上设计了一条上游引物(nsp2-1)和两条下游引物(nsp2-2,nsp2-3),其中一条下游引物(ns2-2...
- 刘永飞黄金海梁智选李秀梅杨爱华郭立力
- 关键词：荧光定量猪繁殖与呼吸系统综合征基因缺失
- A型流感病毒蛋白与宿主蛋白相互作用研究
- A型流感病毒属于正粘病毒科,由8股负链RNA构成,按照核蛋白和基质蛋白的不同进行分型。NS1蛋白是由第8节段RNA编码,该蛋白在抑制宿主蛋白合成,诱导宿主细胞凋亡及促进病毒的合成和增殖等方面均有重要功能。 本研究以19...
- 刘永飞
- 关键词：宿主蛋白真核表达
- A型流感病毒NS1蛋白对细胞生长调控的影响被引量：2
- 2012年
- 为了观察A型流感病毒NS1蛋白对细胞生长调控的影响,构建了2009、1918A型H1N1流感病毒NS1基因带HA、GFP融合标签的真核重组表达载体,用脂质体法转染A549细胞,应用荧光显微镜、An-nexinⅤ染色、流式细胞术、Western-blot检测NS1蛋白对细胞生长的影响。结果显示,构建的NS1基因真核表达载体在A549细胞中均成功表达了NS1蛋白;显微镜下观察到,A549细胞出现皱缩,体积变小,变圆,细胞核固缩,染色质边缘化等细胞凋亡现象。AnnexinⅤ染色法检测表明,试验组染色率均高于空白对照组和阴性对照组,且A549/NS11918的染色率显著(P<0.05)高于A549/NS12009;流式细胞仪检测表明,试验组细胞周期发生G2/M期阻滞,且A549/NS11918的G2/M期与Apoptotic期的细胞比例均大于A549/NS12009;Western-blot检测结果表明,NS1蛋白对p53、p-p53-S15(p53 15位Ser磷酸化)、p21具有上调作用,且NS11918蛋白对这些蛋白表达的上调作用大于NS12009蛋白。结果表明,NS1蛋白能够上调p53、p-p53-S15、p21蛋白表达,使细胞周期阻滞于G2/M期,同时诱导宿主细胞凋亡,NS11918蛋白的作用强于NS12009蛋白。
- 刘永飞李志辉王慧煜梅琳曾琳姣韩雪清
- 关键词：A型流感病毒NS1蛋白细胞凋亡细胞周期
